《表1 引物：尼罗罗非鱼干扰素调节因子4基因的克隆与表达》

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《尼罗罗非鱼干扰素调节因子4基因的克隆与表达》

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根据NCBI上公布的On IRF4基因序列 （Gene Bank登录号： XP＿005476429.1），利用Primer 5.0设计一对开放阅读框 （ Open Reading Frame，ORF ） 扩增引物 （IRF4-ORF-F/R）（表1）。以脾脏的第一链c DNA为模板，通过PCR扩增IRF4的ORF片段，反应体系：Ex Taq 10 μL，dd H2O 7 μL，c DNA模板1 μL，IRF4-ORF-F/R 1 μL。反应条件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，35个循环；72 ℃ 10 min，16 ℃下保存扩增产物。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测达标后，进行切胶回收及PCR产物纯化。将纯化后的PCR产物与p MD18-T载体相连接，转入DH5α 感受态细胞，涂布于含氨苄的LB琼脂培养基，倒置于37 ℃下培养12 h。挑取单菌落，用p MD18-T载体的通用引物M13-R/F进行菌落PCR检测，阳性菌落送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序。