《表3 扩增稻稗ALS基因片段的引物》

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《东北地区稻稗对五氟磺草胺的抗药性机制》

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待稻稗生长至3叶期后，分别在液氮中快速研磨抗药性种群和敏感性种群单株植物叶片组织200 mg，利用植物基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化技术有限公司）提取总DNA。根据NCBI上GenBank登记的稻稗ALS序列（KY071209.1、KY071210.1），利用Primer premier 5和Oligo6.0程序设计了3对引物（见表3），包含了已报道的ALS基因保守区域8个可导致杂草抗药性的突变位点，引物由上海Sangon公司合成，并用梯度PCR仪确定每对引物的最佳退火温度。PCR扩增反应体系总体积为25μL，包括：17.8μL ddH2O，2.5μL 10×PCR Buffer，0.5μL dNTP Mixture（10 mmol/L），1μL MgCl2（50 mmol/L），1μL Primer F（10μmol/L），1μL Primer R（10μmol/L），0.2μL Taq DNA Polymerase（5 U/μL），1μL DNA模板。反应程序如下。