《表2 熏马肠成熟过程中产组胺菌PCR-DGGE图谱上条带序列分析》

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《阿魏酸对熏马肠发酵过程中组胺及产组胺微生物的影响》

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2）变性梯度凝胶电泳（DGGE）聚丙烯酰胺凝胶质量浓度为8 g/dL（丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺37.5 g∶l g）。变性梯度从35%～55%，制好胶后点样，在0.5×TAE缓冲液中，先200 V电压预跑15 min，然后在80 V恒压下电泳14 h。将DGGE胶片在含0.5μL/mL EB的超纯水中摇床染色20 min。再用超纯水20 min脱色3次后，用凝胶成像仪拍照。在紫外灯照射下用灭菌的刀片切割所需的明亮条带，放入无菌的1.5 mL离心管中，加入20μL TE溶液淹没切割下的条带，4℃冰箱过夜后，再次进行PCR扩增（上游引物为U968:5′-AACGCGAAGAACCT TAC-3′；下游引物为L1401:5′-CGGTGTGTACAA GACCC-3′），反应体系同1.2.7.1，扩增程序：95℃预变性10 min，35个循环（95℃，30 s；56℃，30 s；72℃，30 s），最终72℃延伸10 min。PCR产物送去华大测序。将测序结果与NCBI数据库中序列进行比对，对菌株进行鉴定，结果见表2。