《表2 实验中所用引物：盐胁迫条件下古菌超氧化物歧化酶增强细菌降解硝基酚》

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《盐胁迫条件下古菌超氧化物歧化酶增强细菌降解硝基酚》

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为了在底物存在的条件下诱导SodA的大量表达，构建重组质粒p CM-pnpR-PpnpA-sodA-rfp，其中涉及到的多个基因通过重叠延伸PCR（gene splicing by overlap extension PCR）进行连接，引物根据In Fusion一步克隆试剂盒提示设计，如表2所示。普通PCR扩增得到WBC-3的pnpR和PpnpA，以及古菌D1227的sod A和常用荧光标记基因rfp[26]。PCR反应体系：2×Phanta Max Buffer5μL，dNTP Mix（10 mmol/L）0.2μL，基因组模板1μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.3μL，Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL）0.2μL，加蒸馏水补足至10μL。PCR反应条件：95°C 30 s；95°C 15 s，退火（其中pnpR扩增时退火温度为55°C，其他基因均为60°C）15 s，72°C30 s，共30个循环；72°C 2 min。