《表1 凡纳滨对虾中多酚氧化酶PPO纯化》

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《凡纳滨对虾多酚氧化酶的纯化鉴定与生物信息学分析》


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注:比活力=总活力/总蛋白质量,纯化倍数=各步骤分离组比活力/粗酶液比活力;得率=各步骤分离组分总活力/粗酶液总活力。

凡纳滨对虾PPO粗酶液纯化结果见表1,纯化倍数达到65.7,酶比活力大大提高,达到650.1 U/mg蛋白。Chen等[15]用硫酸铵沉淀和和高效疏水性色谱柱纯化粉红虾和白对虾的PPO,纯化倍数为50,酶比活力为100 U/mg蛋白;用丁醇处理和高效疏水性色谱柱纯化粉红虾和白对虾的PPO,纯化倍数为200,酶比活力在320 U/mg蛋白以上。Rolle等[16]用硫酸铵沉淀和高效疏水性色谱柱(苯基琼脂糖CL-4B)纯化斑节对虾的PPO,纯化倍数和酶比活力为58和1.33 U/mg蛋白。樊廷俊等[17]用Sephacryl S-100凝胶柱和Q Sepharose Fast Flow阴离子交换柱纯化中国对虾的PPO,纯度达到30.2,酶比活力达258.0 U/mg蛋白。虾类PPO纯化方法较多,但其纯化效果不同,产生差异原因可能是由于PPO中酚类化合物浓度和类型不同影响了PPO与其他蛋白质的整体结合,目前已发现PPO-蛋白质会干扰蛋白质的纯化,该酶中所含的离子和疏水特性因与酚类物质的结合而随之改变,这也导致纯化过程中需选择不同的洗脱方式[18]。