《表1 EGFR、KRAS及BRAF测序引物序列》

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《乳腺癌组织中EGFR/KRAS/BRAF基因突变检测与分析》

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根据GenBank公开的人EGFR基因序列，采用分子生物学应用软件DNAMAN（美国LynnonBiosoft公司），分别设计了EGFR外显子18～20，KRAS外显子2和3，以及BRAF外显子15的特异性扩增引物（表1）。PCR反应体系包括:模板DNA 5μL（300ng），10×PCR缓冲液5μL，2.5 mmol/L dNTP 4μL，上游及下游引物（5μmol/L）各2μL，Taq DNA聚合酶（5U/μL）0.5μL，用双蒸水补充至50μL。PCR反应条件为:95℃3 min变性，然后95℃30 s，60℃30 s，72℃45 s，28个循环，72℃延伸5 min。扩增产物经100 V的1%琼脂糖凝胶电泳30 min后，EB染色摄片。PCR产物由武汉金开瑞生物公司进行测序，测序结果以DNAMAN软件进行比对分析。