《表5 提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的研究》

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《基于多重计算设计策略提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的热稳定性》

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以枯草芽孢杆菌脂肪酶A为模式蛋白进行的定向进化和计算设计研究比较广泛和深入，如表5所示，研究者利用多轮定向进化手段，虽然筛选库庞大，但是热稳定性提高的效果明显高于大部分计算设计方法，由于酶稳定性不是单独某种作用力或性质所决定的，计算设计在追求筛选数量低的同时，可能导致稳定性提高幅度有限。本研究中通过计算设计大幅度缩小了筛选文库，筛选到了与Rao和Reetz等[5-10]通过易错PCR、饱和突变等手段获得的突变体中的L114P、I157M突变，及F17、M137位点，与Gohlke等和Peng Zhou等[15-16]的计算设计相比更能筛选到定向进化的关键位点，更加准确、高效。但是稳定性提高的空间还较大，可以结合定点饱和突变和柔性及突变组学分析等手段，进一步提高酶的稳定性。