《表2 本研究所用引物：启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达》

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《启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达》

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根据已知基因序列使用引物设计软件Oligo7.0进行引物设计，引物信息见表2。使用引物pul-F/R和TamyL-F/R通过PCR分别扩增pul片段和终止子TamyL，PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳后切胶回收，之后以回收产物为模板通过重叠延伸PCR技术将二者连接，再次进行琼脂糖凝胶电泳回收，回收产物经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后，与经过同样双酶切的pHY300PLK载体通过T4 DNA连接酶进行连接，连接产物转化E.coli TOP10感受态细胞，通过菌液PCR的方式进行阳性克隆鉴定，并对阳性克隆进行序列测定，测序正确的菌株存菌并进行质粒提取，备用。