《表2 基因TraesCS4A01G437800的测序引物》

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《小麦抗麦红吸浆虫候选基因TraesCS4A01G437800的四引物ARMS-PCR标记开发》

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对推定抗虫候选基因TraesCS4A01G437800[35]进行四引物ARMS-PCR标记开发。从‘中国春’参考基因组（IWGSCv1.0，https://wheat-urgi.versailles.inra.fr/）中提取该基因的参考序列及其侧翼序列，用Primer 5软件设计测序引物（表2）。利用高保真酶扩增该基因在小麦亲本（‘冀麦24’‘6218’）中的序列。PCR扩增采用10μL反应体系，包括模板DNA 50 ng、正反引物各0.4μmol/L、1×Pfu PCR MasterMix（天根生化科技(北京）有限公司)。PCR反应条件为：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸2 min，35个循环；72℃终延伸5 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离，对目的条带进行回收，送生工生物工程（上海）股份有限公司进行双向测序。将测序结果与‘中国春’（IWGSCv1.0）的基因组序列进行比对。