《表1 qPCR引物序列》

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《心阳片通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究》

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剪取小鼠心室心肌组织，切碎后加入500μL RNAzol?RT进行RNA裂解；高速匀浆30 s，取出在冰上降温30 s，重复3次；吸取匀浆后混匀悬液，加入200μL无RNA酶水，轻晃至浑浊；室温放置15 min后，以15 000×g离心15 min；取600μL上清，加入3μL 4-Bromoanisole，上下晃动至浑浊；室温下放置5 min后，以15 000×g离心10 min。取500μL上清，加入500μL异丙醇，轻轻混匀后，室温下放置10 min，以15 000×g离心10 min；小心吸去上清，使用200μL 80%乙醇（无RNA酶水与无水乙醇配制）小心清洗沉淀物2遍后；吸去上清，沉淀物室温下干燥3 min。使用30μL无RNA酶水稀释RNA沉淀，冰上放置进行RNA含量测定后，按Fast King RT反转录试剂盒说明书进行反转录；按SYBR Select Master Mix配方配制体系后，充分混匀，离心15 s，置于CFX96荧光定量q PCR检测仪上，反应条件：50℃2 min，95℃30 s；95℃5 s，55℃15 s，42个循环。反应结束后，以GAPDH为内参，采用2-△△Ct法分析BNP mRNA相对表达量。PCR引物序列见表1。