《表1 NtBELLs基因引物》

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《烟草BELL基因家族鉴定及其温室条件下的表达模式分析》

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利用荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR，qRT-PCR）技术检测烟草NtBELLs基因在根、茎、叶等不同组织和胁迫条件下的表达，引物见表1。在冰上配制qRT-PCR反应体系：10μL 2×SYBR Green Master、3μL cDNA模板（40 ng/μL）、上下游引物（10μmol/L）各1μL、5μL ddH2O，充分混匀后瞬时离心。qRT-PCR反应程序采用两步法，即95℃3 min；95℃10 s，60℃30 s，信号采集，45个循环。反应结束后运行溶解曲线程序（65～95℃）。以3株长势相近的烟草叶片作为1个独立的生物学重复，每个组织共设置3个生物学重复。qRT-PCR反应结束后，采用2-ΔCT或2-ΔΔCT方法计算NtBELLs基因的相对表达量[27]。