《表1 目标基因和管家基因引物信息》

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《福寿螺感染广州管圆线虫后G型溶菌酶基因差异表达分析》

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根据G型溶菌酶基因序列以及福寿螺18s rRNA（GenBank登录号为EU520453.1）序列[9]，利用premier 5.0软件设计荧光定量PCR扩增引物（表1），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。参照SYBR Green试剂盒说明书进行荧光定量反应，反应体系为:2×荧光染料预混液12.5μl，cDNA模板2.0μl，上、下游引物各1.0μl（10μmol/L），ddH2O 8.5μl。反应条件为:95℃30 s；94℃5 s，58℃30 s，40个循环；95℃10 s。以100 ng/μ起始浓度的cDNA为模板，以10-1数量级稀释制作标准曲线用于计算基因表达量，以18S rRNA为内参基因进行福寿螺阴性对照组和感染组多组织荧光定量PCR表达水平检测，同实验组每个组织重复3个样品，每个样品检测3次，用△△Ct法处理分析荧光定量PCR数据[10]，设阴性对照组的基因相对表达量为1.0±0.0。