《表1 实时定量PCR引物序列》

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《吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织DNA甲基化的影响》

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采用实时定量-PCR(Real-time PCR）法检测脓毒症小鼠海马组织DNA甲基化转移酶（DNMTs，包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b）的mRNA水平。每组分别取6只小鼠海马组织，采用Trizol试剂提取各组织中RNA，测定RNA浓度；按照cDNA逆转录试剂盒说明书步骤将mRNA逆转录合成cDNA；使用SYBR Green法进行模板的实时定量PCR检测，以3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）为内参。实时定量PCR采用的引物序列见表1。按照SYBR Green Master Mix试剂盒说明书进行操作，采用20μL体系进行PCR扩增，反应条件：95℃预变性10 min；95℃变性10 s，61℃退火30 s，72℃延伸32 s，共40个循环。用Piko Real 96实时荧光定量PCR检测系统进行扩增并分析处理数据。采用2-ΔΔCT法计算目的基因相对表达量。