《表1 实时定量PCR引物序列》

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《慢性饮水型镉中毒对兔膝关节软骨基质金属蛋白酶-13及金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响及意义》

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实时荧光定量PCR检测m RNA的表达:将已编号的实验组及对照组雄兔软骨组织标本从-70℃冰箱取出约100mg，放研钵中加液氮研磨，研磨至粉末状。加入Trizol液，充分混匀，按照Trizol法总RNA提取试剂盒说明进行软骨中总RNA提取并按第一链cDNA合成试剂盒说明反转录为cD-NA，按照MSYBRTMSYBR Green/PCR混合液（2X）试剂盒说明书进行实时定量扩增，检测各组软骨组织中的MMP-13及TIMP-1的m RNA表达情况，每份样品及内参均设3个重复，共27孔，反应在96孔PCR板中进行。各组的检测结果采用通过2-△△Ct方法[3]分析，引物设计见表1，PCR引物由TaKaRa公司设计合成[4]，具体序列见表1。