《表1 单分子测序技术与第二代测序技术的各项参数比较》

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《单分子测序技术在肿瘤诊断中的应用研究进展》

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与第二代测序相比，单分子测序技术具有其独特的优势（表1）。本课题组早期利用第二代测序平台检测的肿瘤转录组数据显示，有许多关键基因序列被漏检，尤其是具有特殊结构的区域。主要是由于第二代测序技术需进行PCR扩增，而高GC或AT含量都不易进行PCR扩增，进而影响基因组测序的完整性。此外，高GC含量的序列难以被打断成小片段，因而无法读取。高AT含量的序列只能通过降低引物延伸温度等方法得到轻微的改善，最终导致PCR扩增片段库中缺乏富含AT的片段[11]。总而言之，第二代测序技术在建库过程中需要扩增和分段环节，二者都可能在读取和序列组装中引入大量偏差和错误[12-14]。然而，单分子测序技术无需进行PCR扩增，可以完全避免产生上述影响，还能最大限度地节约成本。