《表1 本文中所使用的引物》

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《断裂内含肽介导的蛋白纯化系统的构建》

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以pRSFDuet-Npu DnaE质粒为模板，分别加入引物S′IN-1/A′IN-1、S′IN-2/A′IN-2和S′IN-3/A′IN-3进行PCR扩增，构建3种不同的IN片段（N1，N2，N3）。本文中所使用的引物如表1所示。将PCR扩增得到的序列分别于pMD19（Simple）-T载体进行连接，涂布相应抗性的平板，筛选阳性克隆子，酶切和测序验证。利用Nde I和Hind III限制性核酸内切酶将N1与p ET-28a载体进行连接，N2、N3片段分别与pET-21b载体进行连接。将构建好的重组质粒pET-28a-N1及p ET-21b-（N2，N3）转入E.coli BL21(DE3）感受态细胞中，得到重组表达菌株E.coli BL21(DE3）/pET-28a-N1和E.coli BL21(DE3）/pET-21b-(N2，N3），-80℃超低温下甘油管保藏。