《表3 PCR/q PCR引物序列及反应程序》

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《A~2/O生活污水处理系统中抗生素抗性基因的分布及去除》

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注:PCR/qPCR反应程序中[72℃，10 min]*为PCR的延伸过程，qPCR无需进行该过程。

为了使所选目标待测基因具有一定的代表性，尽可能选择近年来研究检出频率及丰度较高、不同种类且具有不同耐药作用机制的ARGs（如tet C属于“外输泵”类机制，sul II属于“目标分流”类机制，erm B属于“目标改性”类机制等）进行研究，同时近年来有研究表明，Ⅰ型整合子对ARGs的污染传播扩散起到重要作用[10，11]。因此，本研究选择4种不同种类的ARGs、Ⅰ型整合子Int I1、16S r DNA 6个基因进行定性检测，4种ARGs包括四环素类ARGs-tet C、磺胺类ARGs-sulII、大环内酯类ARGs-erm B、β-内酰胺类ARGs-blaPSE-1。所用的引物序列、产物长度及PCR反应程序如表3所示。本实验所使用的引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。普通PCR实验体系采用25μL反应体系:12.5μL Premix Ex TaqTMHot Start Version（Takara，中国）；各1μL的上、下游引物；1μL的DNA模板；9.5μL的ddH2O。PCR产物使用质量浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳（110 V，30 min）进行检测。普通PCR定性检测结果显示，YJ生活污水处理系统样本中存在tet C、sulII、erm B、blaPSE-1、Int I1、16S r DNA 6种基因，且琼脂糖凝胶电泳条带清晰明亮，如图2所示。