《表1 基因引物及其构建的载体》

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《大肠杆菌植酸酶AppA在毕赤酵母中的高效表达》

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注：横线部分为酶切位点序列。

根据Gen Bank中E.coli B84植酸酶App A的蛋白序列（ABF60232.1），由上海捷瑞公司合成全基因序列；根据NCBI查找的毕赤酵母GS115基因组上Hac1和P180基因序列，用Snapgene软件设计引物，以GS115基因组为模板，扩增得到Hac1和P180序列，以p PICZMFA为模板扩增得到MF信号肽；以p PICZαAm为模板扩增得到AOXm启动子。PCR扩增体系为0.5μL KOD FX高保真聚合酶，10μL d NTPs，1.5μL上下游引物，50 ng DNA模板，无菌水定容至50μL。扩增体系为94℃预变性5 min，98℃变性10 s，55℃退火30 s，68℃延伸（1 kb/min)，30个循环，68℃延伸10 min。通过1%琼脂糖凝胶鉴定和回收扩增片段，并用相应的限制性内切酶酶切载体得到载体片段。用T4 DNA连接酶将载体与基因片段连接构建重组载体。基因引物及其构建的载体如表1所示。