《表1 扩增引物的序列与反应参数》

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《水生植物小叶满江红内生真菌与古菌的发现及基于高通量测序的群落组成分析》

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以提取的满江红基因组DNA为模板，在ABI GeneAmp?9700型反应仪上进行PCR反应，反应体系20μL:4μL的5×FastPfu Buffer；2μL的2.5mmol/L dNTPs；各0.8μL的上游引物（5μmol/L）及下游引物（5μmol/L）；0.4μL TransStart FastPfu Polymerase；0.2μL牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA)；10 ng Template DNA；补ddH2O至20μL。PCR反应程序：95℃预变性3 min；35个循环95℃30 s；55℃30 s；72℃45 s；72℃延伸10 min，最后4℃保温10 min。引物见表1。PCR产物经1.8%琼脂糖凝胶电泳检测后，委托美吉生物科技有限公司（上海）用Illumina的MiSeq测序仪对rRNA基因的扩增序列进行高通量测序。