《表2 定量PCR引物信息1)》

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《"双氰胺和3,4-二甲基吡唑磷酸盐对蔬菜种植土壤氨氧化细菌和古菌的影响"》

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1)上下游引物分别标注为F和R，S为C或G；K为G或T；Y为C或T；V为A、C或G；R为A或G

采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）技术测定AOB和AOA的amoA基因丰度．反应在罗氏荧光定量PCR仪（LightCycler 480Ⅱ，瑞士）上进行，所用引物见表2．反应体系如下:DNA模板1μL（5ng），上下游引物各（10μmol）0.3μL，SYBR GreenⅠ（Takara，日本）5μL，Rox Reference Dye（Takara，日本）0.2μL，无菌水（ddH2O，实验室）补至10μL．细菌amoA、古菌amoA基因实时荧光定量PCR扩增条件均为:95℃预变性2 min，95℃5 s，55℃30 s，72℃10 s，40个循环；95℃15 s，60℃15 s，95℃15 s．质粒及标准曲线的制备参照文献[28].