《免疫酶技术》求取 ⇩

序1

一、绪言1

目 录1

二、专一性抗血清的制备6

Ⅰ．抗原及其纯化6

（一）抗原6

（二）抗原纯化的一般方法8

（四）β—D一半乳糖苷酶的底物配备法 99

（三）植物病毒纯化的实例一长叶车前花叶病毒的纯化9

Ⅱ．机体的特异性免疫反应及生产抗血清的免疫程序14

（一）机体的免疫反应14

（二）生产抗血清的免疫程序19

（一）抗血清效价测定22

Ⅱ．抗血清效价及其纯度测定22

（二）抗血清纯度鉴定23

Ⅳ．植物病毒抗血清制备的实例25

（一）RMV单价抗血清的制备25

（二）RMV抗血清效价的测定28

（三）RMV抗血清纯度的测定29

三、免疫球蛋白的制备33

Ⅰ．免疫球蛋白及其性质33

（一）免疫球蛋白的基本概念33

（二）免疫球蛋白的化学结构33

（三）冷乙醇法33

（三）免疫球蛋白的免疫学功能35

（四）免疫球蛋白的产生机理35

（一）饱和硫酸铵沉淀法36

Ⅱ．免疫球蛋白的制备36

（二）硫酸钠沉淀法38

（四）压碎法 140

（四）抗体碎片的制备40

Ⅲ．免疫球蛋白的效价、纯度与定量测定41

（一）免疫球蛋白的效价测定41

（二）免疫球蛋白的纯度鉴定42

（三）免疫球蛋白的定量测定42

Ⅳ．植物病毒抗血清免疫球蛋白的制备实例43

（一）饱和硫酸铵法粗提RMV抗血清中的免疫球43

蛋白IgG43

（二）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的纯度鉴定44

（三）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的效价测定46

四、标记酶及其制备47

（一）作为标记抗体用的酶应具备的特点47

Ⅰ．作为标记抗体用的酶47

Ⅱ．酶纯化的一般原理和方法48

（二）现在国内外已用于免疫酶技术的酶48

Ⅲ．酶纯化的实例51

（一）辣根过氧化物酶及其制备51

（二）碱性磷酸酶的制备61

五、酶标记抗体的制备65

I．酶与抗体的交联65

（一）交联方法简述65

（二）酶与IgG交联的原理68

（三）使酶与抗体结合的交联剂……………………………7…（四）酶标记抗体的纯化及保存71

Ⅱ．酶标记抗体制备的实例74

（一）戊二醛一步法交联辣根过氧化物酶与IgG74

（二）戊二醛一步法交联碱性磷酸酶与IgG75

（三）戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG76

（四）过碘酸氧化法交联辣根过氧化物酶与IgG78

（五）简易戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG80

（六）戊二醛—过碘酸钠法交联辣根过氧化物酶与82

IgG82

（七）苯二马来酰亚胺法交联半乳糖苷酶和抗体Ig的83

Fab83

（八）偶氮桥法交联碱性磷酸酶与IgG86

（一）酶标记抗体的定量87

（二）酶（HRP）标记抗体的克分子比值87

Ⅱ．酶标记抗体的定量及其克分子比值87

Ⅰ．酶底物的选择89

（一）在免疫酶技术中作为酶底物的条件89

（二）酶底物的选择89

六、酶底物的配备89

（三）合理使用酶底物90

Ⅱ．酶底物的配备法93

（一）辣根过氧化物酶的底物配备法93

（二）碱性磷酸酶的底物配备法98

（三）葡萄糖氧化酶的底物配备法98

七、免疫酶标固相载体方法101

Ⅰ．免疫酶技术的产生、发展、分类及其命名101

（一）固相载体105

Ⅱ．免疫酶标固相载体方法105

（二）酶联免疫吸附测定（ELISA）109

（三）ELISA应用实例112

（四）ELISA应用的一些说明117

（五）具有吸附能力的小球状物载体方法125

八、免疫酶标组织化学方法131

Ⅰ．组织细胞内源过氧化物酶的抑制131

（一）抑制内源酶的重要性131

（二）酶抑制的一般概念134

Ⅱ．组织及组织内有关抗原的固定136

（一）撕剥表皮139

（二）徒手切片139

Ⅲ．标本的制备139

（三）涂抹法140

（五）冰冻切片法141

（六）石蜡切片法143

Ⅳ．免疫酶标组织化学法原理及实验145

（一）免疫酶标组织化学法原理145

（二）免疫酶标组织化学直接法对青菜叶片（横切面）145

内RMV的定位145

内TuMV的定位149

（三）免疫酶标组织化学间接法对青菜叶片（横切面）149

（四）免疫酶标组织化学简便法对青菜下表皮内RMV150

的检测150

九、非标记免疫酶技术153

Ⅰ．“抗体搭桥”法154

（一）“抗体搭桥”法原理154

（二）混合抗体直接法实验程序155

（三）混合抗体间接法实验程序157

（四）“杂交抗体”法157

（五）扩大抗体法157

Ⅱ．PAP法158

（一）PAP法原理158

（二）PAP法一般程序159

（三）PAP的克分子比例160

（四）PAP最适实验浓度161

（五）讨论162

（六）PAP法对青菜叶片（冰冻切片）内RMV定位164

的实例164

Ⅲ．非标记免疫酶固相载体方法168

十、免疫酶电子显微镜技术170

Ⅰ．制备电子显微镜样品常识170

（一）电子显微镜技术中使用的标本支持物170

（二）超…切片172

Ⅱ．免疫酶标电镜技术177

（一）免疫酶标电镜技术的简要介绍177

（二）免疫酶标电镜技术的一般程序179

（三）免疫酶标电镜技术的实例180

Ⅲ．非标记免疫酶电镜技术183

（一）非标记免疫酶电镜技术的基本原理183

（二）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术的184

程序184

（三）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术对186

RMV在植物组织细胞内定位的实例186

（四）使用PAP复合物的非标记免疫酶电镜技术189

十一、免疫酶技术的进展190

Ⅰ．酶免疫电泳技术190

（一）酶免疫电泳技术的原理190

（二）酶（HRP）免疫电泳技术的程序190

（二）酶联免疫电扩散测定技术的程序192

Ⅱ．酶联免疫电扩散测定技术192

（一）酶联免疫电扩散测定技术的原理192

Ⅲ．酶标记抗原对流免疫电泳194

（一）酶标记抗原对流免疫电泳的原理194

（二）酶标记抗原对流免疫电泳程序（检测血吸虫194

病）194

Ⅳ．酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术196

（一）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的原理196

（二）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的程序（检测196

RMV）196

病毒的程序199

（二）用酶标试纸检测青菜叶片内长叶车前花叶199

（一）用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原的原199

Ⅴ．用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原199

理199

Ⅵ．免疫酶技术的发展趋势202

十二、免疫酶技术的应用207

Ⅰ．免疫酶技术的应用简况207

（一）内分泌学207

（二）免疫病理学207

（三）血液学208

（四）寄生虫学208

（五）微生物学209

（六）人体及动物病毒学（包括立克次氏体）209

（七）植物病毒学210

（十）细胞生物学211

（八）兽医学211

（九）肿瘤学211

（十一）遗传学212

（十二）生物化学212

（十三）医学及药物学212

（十四）食品卫生学213

（十五）其它213

Ⅱ．免疫酶技术应用实例的介绍213

（一）免疫酶标固相载体方法的应用实例213

（二）免疫酶标组织化学方法和免疫酶标电镜技术的218

应用实例218

镜技术的应用实例220

（三）非标记免疫酶组织化学方法和非标记免疫酶电220

Ⅲ．关于免疫酶技术应用的说明224

十三、相关的实验技术225

（一）盐（硫酸铵）的饱和度与盐析技术225

（二）密度梯度离心技术226

（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳技术227

（四）凝胶过滤技术230

（五）离子交换葡聚糖凝胶层析技术232

（六）离子交换纤维素层析技术234

（七）琼脂糖珠免疫吸附剂亲和层析技术238

（八）葡聚糖凝胶（Sephadex）免疫吸附剂亲和层241

析技术241

（九）微量克氏定氮法与双缩脲法242

（十）酶与蛋白抗原的交联技术243

（十一）酶联金葡萄球菌A蛋白（简称PPA）技术244

（十二）样品去盐技术247

（十三）样品浓缩技术248

（十四）冰冻干燥技术251

（十五）样品贮藏方法253

（十六）玻璃器皿（包括盖玻片、载玻片）清洗技术253

（十七）醋酸纤维膜的制备法255

附录256

Ⅰ．试剂（包括缓冲液）配方256

Ⅱ．缩写检索264

参考文献269