《酶标记免疫及其技术应用》求取 ⇩

概论2

第一章　原理与分类2

目录2

一、不均一的酶标记免疫试验3

（一）竞争性检测3

1．用标记抗原竞争地检测抗原3

2．用标记抗体竞争地检测抗原或抗体3

3．间接法检测抗体4

3．酶标记免疫组织抗原定位4

2．用过量标记抗体检测抗原4

1．用过量标记抗原检测抗体4

4．间接法检测抗原4

（三）其它类型4

2．双抗原夹心法检测抗体4

1．双抗体夹心法检测抗原4

（二）非竞争性检测4

4．竞争性酶标记免疫检测抗原4

3．用标记第二抗体检测抗原4

二、均一酶标记免疫试验5

第二章　试剂与制备6

一、固相载体6

二、抗原7

三、抗体7

（一）抗IgG血清制备8

（二）亲和层析法纯化抗IgG8

（三）抗原结合片段（Fab）的制备8

四、样品（血清）9

五、洗涤液9

（一）在不均一ELISA中使用的酶10

（二）在均一ELISA中使用的酶10

六、酶10

七、底物11

（一）3,3—二氨基联苯胺11

（二）5—氨基水杨酸11

（三）邻苯二胺12

（四）邻联甲苯胺12

（五）对硝基苯磷酸盐12

第三章　方法学13

一、酶结合物的制备法13

（一）标记方法13

1．标记蛋白质13

（1）戊二醛法13

一步法14

二步法15

（2）过碘酸钠法15

（3）二马来酰亚胺法16

（4）MBS法17

（5）4,4’—二氟—3,3’—二硝基二苯基砜（FNPS）标记法17

（6）细胞色素C抗体结合物制备19

（7）可溶性过氧化物酶—抗过氧化物酶复合物（PAP）制备19

（8）其它方法21

2．标记半抗原21

（1）混合酐法21

（2）碳化二亚胺法22

（3）过碘酸盐法22

3．免疫学标记法22

（二）酶结合物的纯化22

（三）酶结合物的性质23

1．免疫学性质23

2．酶的催化性质23

3．酶结合物的稳定性23

二、酶标记免疫试验24

2．酶结合物的质量标准24

（一）均一酶标记免疫试验24

1．酶结合物的鉴定24

（四）酶结合物的鉴定与质量标准24

（二）不均一酶标记免疫试验25

1．固相和液相的分离25

2．最适实验条件的选择25

3．结果的判读25

三、酶标记免疫组织抗原定位法25

（一）直接法25

（二）间接法26

（三）无标记抗体酶法26

（四）可溶性酶—抗酶复合物（PAP）法26

（五）四步抗体法27

（六）组织固定法27

1．光学显微镜观察时的组织固定液27

（2）间接法28

（1）直接法28

1．电子显微镜观察28

（七）操作程序28

2．电子显微镜观察时的组织固定液28

2．光学显微镜检查29

1．直接法29

2．间接法29

3．免疫球蛋白桥免疫显色法30

4．可溶性酶—抗酶复合物法30

（八）显色反应30

（九）影响底物溶液的几个因素31

（十）化学法抑制组织内过氧化物酶32

四、常用的酶标记免疫检测操作程序32

（一）酶标记结合物最适浓度测定32

（二）固相载体吸附抗原最适浓度测定33

（三）间接法测定抗体所需器材与试剂33

（四）间接法检测抗体35

（五）特定抗原基质球（DASS）法35

（六）双抗体夹心法检测抗原38

（七）酶标记抗原竞争法测定抗原39

（八）竞争性酶标记免疫试验测定抗原39

第四章　酶标记免疫技术的应用与评价40

一、在寄生虫学中的应用40

（一）血吸虫病40

（二）疟疾41

（三）阿米巴病42

（四）弓桨虫病42

（五）旋毛虫病43

（六）猪囊虫病43

二、在细菌学中的应用43

（一）沙门氏菌属43

（二）布氏捍菌属45

（三）白色念珠菌45

（四）破伤风抗毒素46

（一）单纯疱疹病毒47

三、在病毒学中的应用47

（二）流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒48

（三）麻疹病毒50

（四）天花—痘苗病毒51

（五）脊髓灰质炎病毒51

（六）狂犬病毒51

（七）流行性乙型脑炎病毒52

（八）EB病毒52

（九）乙型肝炎表面抗原53

（十）南芥菜花叶病毒和东痘病毒（植物病毒）54

四、在自身免疫性疾病中的应用55

五、在变态反应性疾病中的应用56

六、肿瘤抗原的定位与电泳沉淀线（弧）的显示56

七、抗体与抗体产生细胞的动力学实验57

八、激素分泌细胞的实验57

九、中枢神经系统解剖经路的实验57

十、动物疾病的检查与监视57

十一、酶标记免疫检测法若干尺度的评价59