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第一章免疫球蛋白技术1

第一节 免疫血清的制备1

一、动物的选择1

二、免疫原1

三、佐剂的应用2

四、免疫的次数和方法3

五、几种常用免疫血清的制备法4

六、免疫血清的效价测定7

七、免疫血清的浓缩8

八、免疫血清的保存9

第二节 免疫球蛋白的分离和提纯9

一、IgG的分离和提纯9

二、IgM的分离和提纯19

三、IgA的分离和提纯20

四、IgE的分离和提纯23

第三节 免疫球蛋白的纯度鉴定25

一、琼脂免疫双向扩散25

二、琼脂免疫电泳27

三、琼脂单纯(区带)电泳28

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳(圆盘电泳)29

五、对流免疫电泳31

第四节 免疫球蛋白的含量测定33

一、紫外吸收法33

二、福林酚法34

三、双缩脲法36

四、其他测定法37

第二章抗原抗体分析技术40

第一节 薄层等电聚焦电泳技术40

第二节 双向电泳技术44

第三节 免疫印迹法49

第四节 高效液相色谱技术54

第三章血清学反应57

第一节 沉淀反应57

一、环状沉淀反应57

二、絮状沉淀反应58

三、琼脂扩散沉淀反应58

第二节 直接凝集反应59

一、试管凝集反应60

二、玻板凝集反应61

三、玻片凝集反应61

四、微量凝集反应62

第三节 微载体技术62

一、间接红细胞凝集反应63

二、反向间接乳胶凝集反应67

三、反向间接炭凝集反应69

第四节 抗球蛋白凝集反应70

第五节 补体的测定72

第六节 补体结合反应77

一、直接补体结合反应77

二、固相补体结合试验87

三、微量补体结合反应89

四、间接补体结合反应92

第七节 固相溶血试验94

第八节 团集反应95

第九节 凝集溶解试验101

第十节 中和试验103

第十一节 红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验111

第四章免疫荧光技术114

第一节 免疫荧光技术的原理及特点114

第二节 荧光抗体的制备117

一、免疫血清的制备及免疫球蛋白的提纯117

二、荧光色素的标记118

第三节 荧光抗体染色法129

一、标本的制备129

二、标本的固定和保存130

三、染色方法132

四、染色标本的保存134

第四节 荧光显微镜检查134

一、光源134

二、滤光片136

三、显微镜137

四、观察方法138

五、使用荧光显微镜的注意事项138

六、摄影139

第五节 非特异性荧光的产生和消除139

一、在细菌学中的应用143

第六节 免疫荧光技术在兽医学上的应用143

二、在霉形体及病毒病方面的应用145

第七节 其他免疫荧光技术147

一、荧光菌团染色法147

二、吖啶橙简易免疫荧光法148

三、红细胞吸附免疫荧光技术149

四、荧光素标记葡萄球菌A蛋白试验149

第五章免疫酶技术150

第一节 概述150

一、免疫酶技术的原理及分类150

二、酶结合物的制备150

第二节 酶联免疫吸附试验151

第三节 免疫酶染色法154

第四节 化学发光免疫测量法155

第五节 其他免疫酶技术158

一、BAS免疫酶技术158

二、斑点酶联免疫吸附测定法161

三、单克隆抗体酶联免疫吸附试验162

四、双特异抗体酶免疫测定法163

第六章放射免疫技术165

第一节 放射免疫饱和分析法165

一、基本原理165

二、测定技术167

三、放射免疫饱和分析法的应用176

第二节 放射免疫沉淀自显影法177

第七章免疫电镜技术180

第一节 免疫复合物电镜技术180

一、离心法180

二、琼脂滤过法180

三、琼脂聚乙二醇法181

第二节 免疫标记电镜技术181

一、铁蛋白抗体法181

二、酶抗体法187

三、重金属标记抗体技术192

四、血蓝蛋白标记抗体技术192

五、病毒的电镜凝集试验193

第八章基因工程技术194

第一节 基因工程的基本原理194

一、目的基因的分离194

二、用于基因重组的基本工具酶195

三、用于分子克隆的载体199

四、基因表达200

第二节 分子克隆基本操作方法201

一、细菌质粒DNA的大量提取201

二、细菌质粒DNA的快速提取202

三、用限制性内切酶酶切DNA203

四、DNA凝胶电泳204

五、用低熔点琼脂糖回收DNA片段206

六、DNA的去磷酸化207

八、细菌质粒的转化208

七、DNA片段与载体DNA的连接208

九、共转化209

十、重组克隆系的筛选与鉴定210

第三节 基因工程技术在免疫学中的应用实例214

一、仔猪大肠杆菌基因工程苗菌株的构建214

二、应用PRPL串联启动子和Clts857调控基因高效表达γ干扰素217

三、用生物素标记DNA探针检定弯曲菌219

附：基因工程技术常用溶液及试剂的配制220

第九章细胞免疫检测技术222

第一节 硝基蓝四氮唑还原试验222

第二节 白细胞杀菌功能试验224

一、体内法225

二、体外法225

第三节 巨噬细胞吞噬功能检测法225

第四节 淋巴细胞转化试验226

一、形态学检查法227

二、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法229

第五节 巨噬细胞移行抑制试验231

第六节 T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶的测定234

第七节 白细胞粘附抑制试验236

第十章T、B淋巴细胞计数技术240

第一节 T淋巴细胞计数法240

一、E-玫瑰花环形成试验240

二、微量E-玫瑰花环形成试验243

三、活性玫瑰花环形成试验244

第二节 B淋巴细胞计数法245

一、B淋巴细胞SmIg的检测246

二、免疫微球法247

三、EAC花环试验248

四、FBC花环试验249

五、EA花环试验251

第三节 溶血空斑试验252

第四节 EY-混合玫瑰花环形成试验255

第十一章葡萄球菌A蛋白技术258

第一节 SPA的基本特性258

一、SPA的理化特性258

二、SPA的免疫学及生物学特性259

第二节 SPA制剂260

一、菌种与培养260

二、SPA的提取261

三、SPA试剂262

第三节 SPA在免疫诊断中的应用265

一、协同凝集试验265

二、酶标SPA染色法267

三、酶标SPA酶联免疫吸附测定法268

第四节 应用IgG-SPA菌免疫法制备抗IgG血清的技术269

第五节 用SPA-Sepharose-4B亲和层析法提取IgG的技术271

第六节 SPA-Sepharose 6MB亲和层析法分离B细胞272

第十二章循环免疫复合物检测方法274

第一节 聚乙二醇沉淀法275

第二节 利用C1q进行循环免疫复合物检测的方法276

一、C1q的制备276

二、C1q琼脂扩散测定法278

三、C1q放射免疫测定法278

四、酶联C1q测定法279

第三节 固相团集素结合测定法280

第四节 C3b致敏酵母菌凝集试验测定法282

第五节 抗补体试验测定法283

一、试管法抗补体试验283

二、微量板法抗补体试验285

第一节 原理288

第十三章单克隆抗体技术288

第二节 材料和方法290

第三节 注意的问题294

第四节 抗鼻疽菌McAb杂交瘤细胞株的建立295

第五节 生物导弹技术297

第一节 红细胞免疫功能测定技术301

第二节 碳免疫测定法301

第三节 免疫染色法302

第四节 胶乳免疫测定法303

第五节 相分离免疫测定技术306

第十五章免疫生物制剂的制备311

第一节 免疫核糖核酸的制备311

一、免疫学作用机理311

二、免疫核糖核酸的类型311

三、制备技术312

四、免疫核糖核酸制剂检定314

一、转移因子的作用机理315

第二节 转移因子的制备315

二、转移因子的制备方法315

五、免疫核糖核酸的临床应用315

三、转移因子的含量测定317

四、转移因子的检定程序317

一、概述319

二、猪胸腺肽的提取319

第三节 胸腺肽的制备319

三、牛胸腺肽的制备320

四、含量测定321

五、活力测定321

第四节 干扰素技术322

一、干扰素的制备323

二、白细胞干扰素的纯化324

第五节 白细胞介素的制备327

一、IL-1的制备327

二、IL-2的制备328

第六节 肿瘤坏死因子的制备329

第十六章免疫学技术常用试剂配制332

第一节 缓冲溶液332

一、缓冲溶液的基本性质332

二、常用缓冲液的配制334

第二节 平衡盐溶液347

一、平衡盐溶液的种类与作用347

二、实际应用及配制要求347

二、常用平衡盐溶液的配制347

二、钙镁盐水349

三、硼酸盐水349

四、联苯胺溶液349

一、Alsever氏液349

第三节 其他溶液的配制349

七、等渗的EDTA二钠溶液350

六、甘油缓冲液350

八、鞣酸溶液350

五、双重氮联苯胺溶液350

九、酯酶染色液351

十、淋巴细胞分离液351

十一、赛氏液352

1、常用元素的原子量表353

2、希腊字母表353

附录353

3、常量、微量和超微量度量衡单位名称表354

4、常用实验动物正常体温变动范围(直肠温)355

5、免疫学常用缩写略语356

6、离心机与离心力363

第十四章其他免疫学技术398