《基因诊断》

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第一章 总论1

第一节 关于基因1

一、基因的概念1

二、基因的结构3

前言4

三、基因的主要功能5

第二节 基因的探测与分析13

一、DNA的变性与复性13

二、基因探针与分子杂交13

三、基因分析的途径14

第三节 基因诊断的特点和意义18

第二章 基因诊断在遗传病上的应用22

第一节 血红蛋白病22

一、镰刀状细胞贫血的基因诊断22

二、α地中海贫血27

三、β地中海贫血37

第二节 其它遗传病52

一、苯丙酮尿症52

二、先天性α1抗胰蛋白酶缺乏症55

三、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症——痛风、自毁容貌综合征58

四、血友病60

第三节 产前胎儿性别的探测63

第三章 基因诊断技术在其它疾病上的应用66

第一节 大肠杆菌热敏内毒素基因的探测66

第二节 病毒基因的探测68

一、肠道病毒68

二、轮状病毒69

三、Epstein-Barr疱疹病毒69

四、腺病毒70

五、乙型肝炎病毒71

六、艾滋病的基因诊断72

第三节 寄生虫病的基因诊断73

第四节 癌基因的探测74

第五节 动脉粥样硬化75

第四章 基因诊断的实验方法78

第一节 基因诊断的一般实验步骤78

第二节 基因探针的制备78

一、特异基因的分离78

二、质粒DNA的提取94

三、DNA片段的分离制备106

四、DNA的同位素标记112

五、DNA的非同位素标记124

第三节 人类色染体DNA的制备131

一、白细胞DNA的提取132

二、绒毛及羊水细胞DNA的提取139

三、脾、肝及胎盘DNA的提取142

第四节 DNA的限制性内切酶降解144

一、概述144

二、试剂147

三、方法147

四、注意事项148

五、影响内切酶活性的常见因素149

第五节 DNA酶解片段的电泳分离151

一、原理151

二、试剂152

三、电泳装置154

四、方法154

五、注意事项157

六、影响DNA电泳迁移率的主要因素158

七、琼脂糖凝胶照像160

一、原理162

第六节 Southern印迹法162

二、试剂163

三、方法163

四、注意事项165

第七节 DNA分子的固相杂交167

一、原理167

二、一般基因探针的杂交168

三、人工合成探针的杂交170

四、斑点杂交及菌落或噬菌体斑的原位杂交171

五、影响杂交的因素175

第八节 放射自显影技术178

附录一 重要试剂母液的配制182

附录二 DNA数据单位184

附录三 凝胶过滤基质185

附录四 限制性内切酶保温缓冲液用表186

附录五 质粒pBR322限制性内切酶图谱187

附录六 DNA片段长度标准物188

附录七 脱氧核苷-5′-三磷酸化合物的分子量189

附录八 人β珠蛋白基因簇的限制性内切酶图谱及其多态性位点190

附录九 人α1珠蛋白基因的核苷酸序列191

附录十 人β珠蛋白基因的核苷酸序列192

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