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第一章细胞化学概论1

第一节 概述1

第二节 细胞化学染色标本及其方法的原理2

一、金属—金属盐沉淀反应原理3

二、偶氮偶联法原理3

三、过碘酸Schiff氏剂反应法原理3

四、联苯胺法原理3

五、色素形成法原理4

六、脱氢酶显示法原理4

七、底物标记法原理4

八、荧光染色与免疫荧光法原理4

九、酶标抗体法原理5

第三节 细胞化学染色标本制备过程中的注意事项5

一、孚尔根反应显示DNA方法7

第一节 核酸和硫氢基的显示7

第二章核酸、糖原和酶的细胞化学方法7

二、甲绿—派郎宁显示脱氧核糖核酸和核糖核酸9

三、吖啶橙荧光染色显示DNA和RNA10

四、DDD法显示硫氢基11

第二节 多糖类的显示13

一、过碘酸雪夫反应显示糖元和其它多糖物质13

二、爱先兰—PAS法显示酸性和中性粘多糖物质14

第三节 脂类的显示15

第四节 酶的显示16

一、碱性磷酸酶的显示16

二、酸性磷酸酶的显示法18

三、三磷酸腺苷酶显示法19

(一)酸性ATPase显示法19

(二)中性ATPase显示法20

(三)碱性ATPase显示法21

四、葡萄糖-6-磷酸酶显示法22

五、5-核苷酸酶的显示法22

六、β-葡萄糖醛酸酶显示法23

七、α-醋酸萘酯酶显示法24

八、细胞色素氧化酶显示法26

九、过氧化酶显示法27

十、单胺氧化酶显示法28

十一、琥珀酸脱氢酶显示法29

十二、乳酸脱氢酶显示法30

十三、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶显示法31

十四、还原型辅酶Ⅰ显示法32

十五、还原型辅酶Ⅱ显示法33

第五节 常用缓冲液配制34

第一节 概述38

第三章细胞化学定量技术——显微分光光度计38

第二节 原理39

第三节 显微分光光度仪的组成40

一、光源40

二、单色器和滤光片40

三、显微镜40

四、光电组合件40

五、标本制备41

六、测量方法41

第四章细胞化学定位和定量技术在中西医领域中的应用42

第一节 在细胞生物学研究中的应用42

第二节 对肿瘤细胞DNA的定量研究45

第三节 对中药抗肿瘤作用机理的研究47

第四节 对针刺作用机理的研究48

第五节 对中医“脾气虚”证研究的应用49

第六节 在酒精性肝损伤诊治研究中的应用51

第七节 在运动性肌肉研究的应用55

第八节 中药大蒜油对人宫颈糜烂的细胞化学研究60

第五章细胞化学技术在中医微观辨证学研究中的应用64

第一节 阴阳虚实辩证的细胞化学研究64

第二节 在舌苔原理研究中的应用67

第三节 寒热辨证舌苔上皮定量细胞化学70

第四节 脾虚患者外周血免疫细胞ANAE的细胞化学研究72

第五节 虚实辨证红细胞免疫功能与淋巴细胞ANAE活性同步检测75

第六节 慢性肾炎患者外周血细胞化学ANAE变化与中医辨证关系的研究77

第七节 胃脘痛属脾虚者舌苔上皮的细胞化学研究79

第八节 潜熄宁对2KIC—RHR心肌糖原含量及琥珀酸脱氢酶活性的影响81

第九节 潜熄宁对2KIC—RHR模型淋巴细胞ANAE活性影响83

第六章流式细胞术及其应用87

第一节 原理87

二、石蜡包埋样品的制备89

三、染色方法89

一、新鲜标本的制备89

第二节 标本的制备89

四、流式细胞术检测人外周血T细胞亚群92

五、DNA倍体分析93

六、流式细胞术分析Bcl-2基因蛋白94

第三节 流式细胞术在细胞周期研究中的应用94

一、肿瘤学方面94

二、染色体核型分析96

第四节 流式细胞术在免疫学方面的应用96

第五节 流式细胞术在中药抗癌作用方面的应用97

第六节 流式细胞术在肿瘤细胞凋亡研究中的应用99

第七章激光扫描共聚焦显微术及应用102

第一节 原理102

第二节 特点104

五、动态观察106

四、直方图分析106

六、荧光光漂白后的光恢复—活细胞内分子运动的测定106

一、单染样品的观察和分析106

三、自动图象扫描观察与分析106

二、双染样品的观察和分析106

第三节 功能和应用106

七、细胞间通讯的测定107

八、免疫荧光的定量测定107

九、生物活性物质活性封闭和解封闭的测定107

十、细胞膜流动性测定108

十一、定量共聚焦图像分析108

十二、粘附细胞分选109

十三、细胞内激光显微外科109

十四、应用109

十五、几种荧光染料的染色方法112

一、双光子技术的原理115

第四节 双光子(多光子)显微镜115

二、双光子显微镜的优点116

第八章电镜细胞化学及其应用119

第一节 电镜细胞化学的基本技术119

一、取材与固定119

二、漂洗组织119

三、预切片119

四、置换缓冲液120

五、孵育120

六、二次漂洗120

七、后固定120

八、脱水、包埋120

九、超薄切片和染色120

第二节 糖类的电镜细胞化学120

一、高碘酸盐—硫卡巴肼—蛋白银(PA-TCH-SP)染色法120

二、透析铁染色法121

三、高铁二胺染色法122

第三节 脂类的电镜细胞化学123

一、基本原理123

二、用品123

三、操作步骤124

四、结果124

五、注意事项124

第四节 酶的电镜细胞化学125

一、酸性磷酸酶125

二、胞嘧啶单核苷酸酶126

三、碱性磷酸酶127

四、5-核苷酸酶129

五、葡萄糖-6-磷酸酶130

六、三磷酸腺苷酶131

七、腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶132

八、烟酰胺腺膘呤二核苷磷酸酶134

九、焦磷酸硫胺素酶134

十、乙酰胆碱酯酶136

十一、髓过氧化物酶137

十二、血小板过氧化物酶138

十三、单胺氧化酶138

十四、细胞色素氧化酶139

十五、琥珀酸脱氢酶140

第五节 酶电镜细胞化学的注意事项142

第六节 缓冲溶液的配制143

第七节 电镜细胞化学的应用147

第九章免疫组织、细胞化学及其应用150

第一节 免疫组织、细胞化学的原理150

第二节 免疫组织、细胞化学的常用染色方法150

一、免疫荧光法150

二、免疫酶法151

三、抗生物素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC法)153

第三节 非特异性染色及染色对照154

一、非特异性染色及其消除方法154

二、染色对照155

三、抗体稀释度156

第四节 原位杂交157

一、探针157

二、试剂配制157

三、标本制备159

四、杂交与显色159

五、原位杂交对照试验160

第五节 免疫组织细胞化学在医学研究中的应用161

一、大鼠胃肠胰系统IAPP免疫反应细胞的定位及发育研究161

二、大鼠实验性胃溃疡自愈机制研究163

三、免疫组织细胞化学在消化系统中的应用164

一、分散体系169

第二节 溶胶的基本概念及内涵169

第十章免疫金银染色技术和抗独特型抗体制备及其应用169

第一节 免疫金银染色技术的基本原理169

二、溶胶的制备170

三、溶胶的纯化170

四、溶胶的颜色171

五、溶胶的稳定性和聚结171

六、影响溶胶稳定性的因素171

第三节 胶体金的制备方法172

一、制备前的准备173

二、制备方法和步骤173

第四节 胶体金标记蛋白质的制备175

一、待标记蛋白和金溶胶的准备175

二、胶体金与待记蛋白质用量比例的确定175

四、胶体金标记蛋白质的纯化176

三、胶体金与待记蛋白质的结合176

五、胶体金标记蛋白质的质量鉴定177

第五节 应用于光镜水平的免疫金银法177

一、免疫组化滤纸模型的应用177

二、石蜡切片的IGSS染色179

三、冰冻切片的IGSS染色180

四、半薄切片的IGSS染色180

第六节 应用于电镜水平的免疫金法182

一、包埋前染色182

二、包埋后染色184

第七节 双重和多重免疫标记方法原理简介185

一、应用胶体金标记特异性抗体的直接法186

二、应用不同种动物产生的特异性抗体及相应的标记二抗的间接法186

三、应用同种动物特异性抗血清及相应的标记二抗的间接法186

五、标记抗原法187

四、应用同种动物特异性抗血清及胶体金—葡萄球菌A蛋白法187

第八节 抗独特型抗体在免疫学中的应用189

一、抗体的独特型与抗独特型189

二、抗独特型抗体Ab2β的制备与检测189

三、抗独特型抗体在疫苗研究中的应用190

四、抗独特型抗体应用于受体的纯化及定位191

五、抗独特型抗体在实际应用中的利与弊192

第十一章中间丝的免疫细胞化学及应用196

第一节 中间丝与肿瘤的鉴别诊断196

一、中间丝196

二、抗角蛋白抗体及癌的鉴别诊断197

三、波纹蛋白、结蛋白抗体及软组织肉瘤的诊断199

四、胶质细丝蛋白抗体与胶质瘤的诊断200

五、抗神经丝蛋白抗体与神经瘤的诊断200

二、中间丝的分布似乎也不是一成不变201

一、中间丝的分布似乎并非一定“特异”201

第二节 中间丝肿瘤鉴别法遇到的新问题201

第十二章细胞凋亡和几种基因表达205

第一节 细胞凋亡的研究简史205

一、细胞凋亡的概念206

二、细胞凋亡的特点206

第二节 细胞凋亡与肿瘤207

第三节 细胞凋亡的机理209

一、核酸内切酶在细胞凋亡中的作用209

二、谷氨酰胺转移酶210

三、蛋白激酶C(PKC)211

四、细胞凋亡相关基因211

第四节 细胞凋亡的分子调节212

一、c-myc癌基因与细胞凋亡212

三、Bcl-2抑制细胞凋亡及其机理213

二、-abl原癌基因213

四、抑癌基因p53与细胞凋亡215

五、ICE基因216

六、APO-I(Fas)系统216

七、p21基因和细胞分化及细胞凋亡217

第五节 影响细胞凋亡的因素及肿瘤治疗220

一、诱导细胞凋亡的因素或因子220

二、细胞生长因子去除后细胞凋亡220

三、细胞凋亡的抑制220

四、细胞凋亡与肿瘤治疗221

五、中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究222

第六节 细胞凋亡的检测225

一、细胞通讯检测225

二、细胞凋亡检测226

中、英文索引233

图谱说明237