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第一章层析法概述1

一 层析法的产生及发展1

二 层析法的定义2

三 层析过程2

四层析法的分类3

（一）按分离原理分类3

（二）按操作形式分类3

（三）按两相所处的状态分类3

第二章反流分布法4

一 基本原理4

二 溶剂的选择8

三反流分布仪器9

（一）分液漏斗9

（二）不锈钢反流分布分析器10

（三）玻璃反流分布分析器10

四应用10

（一）分离混合物10

（二）提纯化合物13

（三）判断化合物的纯度13

（四）鉴定化合物13

第三章柱层析法14

第一节吸附柱层析法14

一 基本原理14

二 吸附等温线14

三 分配系数与保留体积16

四 吸附剂16

五 溶剂与洗脱剂20

六 操作方法22

第二节分配柱层析法23

一 基本原理23

二 分配系数与保留体积的关系式23

三 支持剂24

四 固定液24

五 流动相与溶剂25

六 操作方法25

第三节应用实例26

一 菠菜叶色素的分离26

二 中药青蒿化学成分的提取与分离27

三 脂蛋白脂酶（LPL）和肝一甘油三酯酶（H—TGL）的分离27

四 血清蛋白质成分的分离27

五 多核甘酸磷酸化酶的分离28

第四章纸层析法28

一基本原理28

（一）化学结构与分配系数的关系29

（二）溶质的极性与分配系数的关系31

（三）溶质与溶剂间的互相作用与分配系数的关系32

（四）PH与分配系数的关系33

（五）展开方式与Rr值的关系33

二 层析滤纸的选择与处理34

三 固定相35

四 展开剂的选择35

五操作方法36

（一）点样36

（二）展开37

（三）显色39

（四）比移值（Rf）的测定39

六定性、定量分析41

（一）定性分析41

（二）定量分析41

七应用实例41

（一）磺胺类药物的分离与鉴定41

（二）香豆精类化合物的分离42

（三）强心甙的分离42

（四）羟基蒽醌类的分离42

（五）氨基酸的分离与鉴定43

（六）对合成CDP一胆碱的鉴定44

第五章薄层层析法44

一 基本原理44

二吸附剂的选择45

（一）吸附剂的种类45

（二）吸附剂颗粒的大小46

（三）吸附剂的选择46

三展开剂的选择46

四 固定相、展开剂（流动相）和被分离物质三者的关系46

五操作方法47

（一）制板47

（二）点样50

（三）展开50

（四）显色54

（五）Rr值的测定54

六定性、定量分析54

（一）定性分析54

（二）定量分析55

七应用实例57

（一）药剂制剂中维生素A与维生素E的分离57

（二）苦参素针剂中氧化苦参碱和氧化槐果碱的分离57

（三）心律片中苦参碱和槐果碱的分离与测定57

（四）四季青和丹参中原儿茶醛的分离58

（五）生物碱的分离58

（六）单核苷酸的分离59

第六章离子交换层析法60

一 基本原理60

二离子交换剂的种类、结构及性质61

（一）无机离子交换剂62

（二）有机物离子交换剂62

（三）电子交换树脂（氧化还原交换树脂）66

（四）选择性离子交换树脂67

（五）吸附树脂68

三离子交换树脂的特性68

（一）交联度68

（二）交换容量及测定方法68

四离子交换理论70

（一）选择性70

（二）分配系数72

五离子交换树脂的选择72

（一）阳离子交换树脂72

（二）阴离子交换树脂72

六离子交换树脂的处理与再生72

（一）强酸性阳离子交换树脂的预处理73

（二）强碱性阴离子交换树脂的预处理73

（三）弱酸性阳离子交换树脂的预处理73

（四）弱碱性阴离子交换树脂的预处理73

（五）再生74

七操作方法74

（一）装层析柱74

（二）样品量与树脂量的比例74

（三）洗脱74

八应用实例74

（一）氨基酸的分离74

（二）核苷酸的分离75

（三）人血清胰蛋白酶抑制剂的分离纯化76

（四）蛋白质的分离76

第七章凝胶层析法77

一基本原理77

（一）分子筛作用77

（二）凝胶层析内水和外水体积的计算78

（三）分配系数（KD）的测定79

（四）Rf值的测定和意义80

（五）分离体积80

（六）上样体积的预测80

二凝胶的种类81

（一）天然高聚物81

（二）人工合成的高聚物81

三 葡聚糖凝胶的化学结构与性质81

四凝胶层析中的其他作用83

（一）离子交换作用83

（二）结构效应85

五操作方法85

（一）凝胶层析柱的制备85

（二）加样89

（三）洗脱90

（四）凝胶的再生91

六应用实例91

（一）免疫球蛋白的轻链和重链的分离91

（二）兔网组织细胞可溶性RNA的分离92

（三）环状核苷酸的分离92

（四）猪四肢骨中抗炎蛋白肽的分离93

（五）葡萄糖中淀粉的分离93

第八章气相层析法94

第一节概述94

一 气相层析法的分类94

二气相层析法的特点94

三气相层析仪的一般流程95

四气相层析法的一般分离原理95

第二节层析理论96

一基本概念96

（一）色谱峰96

（二）基线96

（三）保留值96

（四）色谱峰区域宽度98

二塔板理论98

（一）分配平衡99

（二）塔板理论100

三速率理论一范氏方程（Van Deemtor）104

（一）涡流扩散项104

（二）分子扩散项105

（三）传质阻力项106

第三节气相层析仪107

一层析柱107

（一）层析柱的分类107

（二）固定液107

（三）载体（担体）110

（四）填充柱的制备113

二检测器113

（一）检测器的分类113

（二）检测器的性能指标114

（三）热导池检测器（TC D）116

（四）氢焰离子化检测器（FID）118

第四节气相层析分离条件的选择120

一气相层析分离条件选择的指标120

（一）柱效能120

（二）选择性121

（三）分离度121

（四）分离度与柱效能、选择性及容量因子间的关系122

二气相层析分离条件的选择123

（一）固定相的选择123

（二）柱长的选择123

（三）柱温的选择123

（四）载气及线速的选择124

（五）气化室温度及检测室温度的选择124

（六）进样量的选择125

第五节样品的预处理125

一 分解法125

二衍生物制备法125

（一）酸类125

（二）氨基酸126

（三）羟基衍生物126

（四）胺类127

（五）醛酮类127

（六）酯类127

第六节定性、定量分析128

一定性分析128

（一）利用保留值定性128

（二）利用化学反应定性128

二定量分析130

（一）峰面积的测量方法130

（二）定量校正因子135

（三）定量方法136

第七节误差和数据处理139

一 准确度与精密度140

二误差与偏差140

（一）误差140

（二）偏差140

（三）可信度143

三 试验数据的取舍144

四定量分析误差的来源144

（一）系统误差144

（二）非系统误差145

（三）过失误差145

五提高分析结果准确度的方法145

（一）增加平行测定次数，减小非系统误差145

（二）检查并消除测定过程中的系统误差145

六 定量分析允许偏差范围146

第八节 气相层析仪故障的产生及排除方法147

第九节应用实例154

一 冰醋酸的含水量测定154

二 强力素霉含量测定155

三 药品中糖精的分离与测定155

四 七种常见巴比妥和导眠能的分析156

五 中草药有效成分一砂仁挥发油的分析157

六17α一乙炔雌三醇3一环戊醚的测定157

七 尿中17—酮类固醇的测定158

八 血小板中甘碳五烯酸（20： 5， W3）与花生四烯酸（20： 4，W6）比值的分析159

九 血液中甲硫醇（M T）、乙硫醇（ET）和甲硫醚（DMS）的分离160

十 孕妇羊水中软脂酸的测定160

十一 对疾病的快速诊断161

第九章高效液相层析法161

第一节概述161

一 高效液相层析法的分类161

二 高效液相层析法的特点162

三 高效液相层析仪的一般流程162

第二节基本原理163

一四种类型液相层析的保留值163

（一）保留时间163

（二）保留体积164

（三）比移值（Rr）164

二四种类型液相层析的分配系数（K）164

（一）分配层析164

（二）吸附层析164

（三）离子交换层析165

（四）凝胶层析165

三分离度166

（一）分离度与α值的关系167

（二）分离度与k的关系167

（三）分离度与n的关系169

四速率理论方程简介169

第三节高效液相层析仪170

一高压输液泵170

（一）对高压输液泵的技术要求170

（二）高压输液泵的种类171

（三）各种高压输液泵的伏缺点比较174

二层析柱及其填装174

（一）层析柱174

（二）进样器175

（三）柱出口接头175

（四）柱子与检测器的连接管175

（五）层析柱的填装175

（六）柱效检查179

三检测器179

（一）紫外吸收检测器（UV）179

（二）示差折光检测器（RI）181

（三）移动式氢火焰离子化检测器183

（四）荧光检测器185

（五）介电常数检测器186

（六）微吸附热检测器187

（七）电导检测器188

四 国外生产高效液相层析仪的厂家、型号及性能191

第四节 固定相与流动相197

一固定相197

（一）液一固吸附层析所用的固定相197

（二）液一液分配层析所用的固定相197

（三）离子交换层析所用的固定相一离子交换树脂199

（四）凝胶层析所用的固定相199

二流动相205

（一）对流动相的一般要求205

（二）流动相的分类205

（三）溶剂的极性206

（四）混合溶剂207

（五）程序洗提207

（六）流动相的除气方法208

第五节高效液相层析条件的选择208

一液相层析分离类型的选择208

（一）按分子量大小范围来选择层析类型209

（二）按样品溶解度来选择层析类型209

（三）按样品分子结构来选择层析类型209

二流动相的选择210

（一）流动相与层析柱的稳定性210

（二）流动相对固定相不能有不可逆的作用210

（三）流动相要适用于所选择的检测器210

（四）流动相对所分析的样品要有一定的溶解能力210

三固定相的选择211

（一）固定相的形状212

（二）填充剂的颗粒直径和表面积212

四操作条件的选择212

（一）层析柱长度的选择212

（二）层析柱内径的选择213

（三）柱压力的选择213

（四）进样量（进样体积）的选择213

（五）流动相流量的测定与最佳线速214

（六）多组分复杂的化合物的分离技术215

第六节定性、定量分析216

一定性分析216

（一）利用保留值（V R或tR）定性216

（二）同系列化合物的保留值对数对取代基碳原子数作图定性216

（三）利用其他分析仪器结合定性216

（四）利用官能团化学反应定性217

（五）利用已知物内标法定性217

二定量分析217

（一）定量操作注意事项217

（二）定量分析方法218

第七节应用实例220

一 维生素类药物的分离220

二 激素类药物的分离220

三 制剂中的肾上腺素类和抗组织胺类药物的测定221

四 多烯抗真菌素的分离222

五 三尖杉酯碱类的分离与测定222

六 胆盐的分离和定量223

七 青蒿素及其衍生物的含量测定224

八 血清皮质醇和11一脱氧皮质醇的测定225

九 血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中胆固醇的快速测定225

第十章液滴逆流层析226

一 液滴逆流层析的原理226

二 液滴逆流层析的装置228

三 液滴逆流层析的应用229

第十一章电泳法232

第一节基本原理232

一 电泳法的产生及发展232

二 电泳分类233

三 电泳的原理233

四影响电泳的因素234

（一）电场强度235

（二）质点颗粒235

（三）缓冲溶液的离子强度236

（四）缓冲容量和PH值236

（五）电渗237

第二节几种常见的电泳238

一纸上电泳238

（一）原理238

（二）操作方法239

（三）应用实例241

二醋酸纤维素薄膜电泳243

（一）原理243

（二）操作方法243

（三）应用实例244

三聚丙烯酰胺凝胶电泳245

（一）聚丙烯酰胺凝胶的聚合、结构及其性质245

（二）聚丙烯酰胺凝胶的分子筛作用248

（三）连续缓冲体系和不连续缓冲体系248

（四）操作方法250

四对流免疫电泳253

（一）原理253

（二）操作方法253

五等电点聚焦电泳255

（一）原理255

（二）操作方法257