《医学细胞化学与细胞生物技术》求取 ⇩

1.1 血液、骨髓和其它细胞的采集1

1.1.1 人外周血的采集1

1 血液及其它悬液细胞的采集、分离和标本制作1

1.1.2 小动物的采血2

1.1.3 从脾脏和淋巴结采集免疫细胞2

1.1.4 骨髓的采取及检查原则3

1.2 血液细胞和其它细胞的分离4

1.2.1 分离外周血中的白细胞5

1.2.2 分离外周血单个核细胞6

1.2.3 淋巴细胞，单核细胞及巨噬细胞的分离11

1.2.4 中性粒细胞的分离17

1.2.5 从器官组织中分离和制备细胞悬液18

1.3 涂片制作21

1.3.1 涂片前准备21

1.3.4 涂片质量评价22

1.3.2 血涂片制作22

1.3.3 骨髓涂片法22

1.3.5 离心涂片法23

1.4 常用染色技术23

1.4.1 瑞氏染色24

1.4.2 姬姆萨染色25

1.4.3 瑞氏姬姆萨混合染色26

1.4.4 瑞氏姬姆萨双重染色26

1.4.5 麦一格氏染色26

1.4.6 苏木精伊红染色27

1.5 涂片检查法28

1.5.1 骨髓涂片的检查28

1.5.2 血涂片的检查29

1.5.3 骨髓细胞的正常值29

2.1 细胞化学的技术要求32

2.血液细胞化学32

2.2 细胞化学的研究内容33

2.3 细胞化学的研究方法33

2.3.1 显示方法33

2.3.2 固定和固定液35

2.4 过氧化酶38

2.4.1 Sa？o法38

2.4.2 Washburn法39

2.4.3 DAB法(Graham和Karnovsky 1966)39

2.4.4 髓性过氧化物酶40

2.4.5 过氧化酶的诊断学意义40

2.5 磷酸酸41

2.5.1 碱性磷酸酶的显示方法41

2.5.2 酸性磷酸酶显示法44

2.5.3 三磷酸腺苷酶的显示45

2.6.2 酸性醋酸酯酶47

2.6 标志性脂酶47

2.6.1 Brauynstein法显示醋酸酯酶47

2.6.3 氯醋酸ASD酯酶与丁酸酯酶的双重组化显示49

2.6.4 丁酸酯酶的显示50

2.6.5 氯醋酸ASD酯酶的显示51

2.6.6 乙酸胆碱酯酶的显示(Karnovsky和Roots法)51

2.7 脱氢酶52

2.7.1 甲？反应显示琥珀酸脱氢酶52

2.7.2 可溶性脱氢酶的显示53

2.7.3 葡萄糖6磷酸脱氢酶的高铁血红蛋白还原试验55

2.7.4 葡萄糖6磷酸脱氢酶的染色洗脱法55

2.7.5 硝基蓝四唑试验56

2.8 末端脱氧核苷酸转移酶57

2.8.1 TdT的免疫荧光显示法58

2.9 糖原及其他多糖58

2.9.1 高碘酸雪夫(PAS)反应显示糖原和多糖58

2.10.1 甲绿派若宁法显示核糖核酸(RNA)61

2.10 核酸的显示61

2.10.2 Feulgen氏法显示脱氧核糖核酸(DNA)62

2.11 脂类63

2.11.1 脂类的苏丹黑B显示法64

2.12 含铁血黄素的显示(普鲁氏蓝反应)65

2.13 血液细胞化学在急性白血病诊断和预后中的应用66

2.13.1 急性粒细胞性白血病67

2.13.2 急性早幼粒细胞白血病(APL，M3型)68

2.13.3 急性单核细胞型白血病(AMOL，M5型)68

2.13.4 急性粒单细胞型白血病(AMMOL，M4型)68

2.13.5 急性红白血病(AEML，M6型)69

2.13.6 急性淋巴细胞型白血病(ALL)69

2.13.7 慢性粒细胞型白血病(CML)70

2.13.8 毛细胞白血病(AHL)70

3.1 免疫血清的制备72

3.1.1 抗原72

3 免疫组织化学72

3.1.2 佐剂73

3.1.3 兔抗辣根过氧化物酶抗血清的制备73

3.1.4 羊抗兔免疫球蛋白抗血清的制备75

3.1.5 兔抗小鼠胸腺细胞抗血清的制备75

3.1.6 兔抗绵羊红细胞抗血清的制备76

3.1.7 抗半抗原小肽的抗血清制备77

3.1.8 胆囊收缩素(CCK)片断的抗血清制备78

3.1.9 特异性糖蛋白的提取及其抗体的制备79

3.2 免疫血清的提纯81

3.2.1 盐析法81

3.2.2 凝胶过滤法82

3.2.3 琼脂糖凝胶制备和纯化抗体83

3.3 抗血清效价和纯度的测定86

3.3.1 琼脂双向扩散法86

3.3.2 环状沉淀法87

3.4.1 可溶性酶抗酶(PAP)的制备88

3.4 几种免疫组织化学标记物的制备88

3.4.2 酶标蛋白A和酶标抗体的制备90

3.4.3 胶体金标记蛋白A的制备92

3.4.4 胶体金标记羊抗兔抗血清的制备92

3.5 免疫组织化学染色92

3.5.1 免疫组织化学的类型92

3.5.2 免疫组化染色的重要环节93

3.5.3 免疫组化的固定法95

3.5.4 免疫组化的包埋和切片97

3.5.5 免疫组化学显示法98

4 细胞的活体染色、相差显微镜及显微摄影术。115

4.1 活体染色115

4.1.1 体内活体染色115

4.1.2 体外活体染色116

4.2 相差显微镜及其应用121

4.2.1 相差显微镜的原理与结构122

4.2.2 相差显微镜的调试原则123

4.2.3 血液活细胞标本制备与观察123

4.2.4 活细胞标本的制备与观察125

4.2.5 培养细胞的观察125

4.3 显微摄影术125

4.3.1 显微摄影装置126

4.3.2 显微照像机的安装127

4.3.3 显微摄影操作步骤127

4.3.4 胶片冲洗128

4.3.5 印制照片和幻灯片129

4.3.6 滤色镜的选择和使用129

4.3.7 正确的曝光130

4.3.8 彩色显微摄影中的注意事项131

5 荧光显微术133

5.1 荧光和荧光染料133

5.2.1 光源135

5.2 荧光显微镜135

5.2.2 滤片系统136

5.2.3 主机和暗视野集光器136

5.2.4 荧光暗视野显微镜的操作原则138

5.3 照相139

5.4 组织和细胞荧光的分类139

5.4.1 自发荧光139

5.4.2 诱发荧光139

5.4.3 酶促荧光139

5.4.4 荧光染色139

5.4.5 免疫荧光140

5.5 荧光染色法140

5.5.1 吖啶橙荧光染色显示DNA、RNA和酸性粘多糖140

5.5.2 吖啶橙荧光染色鉴别细胞的死活141

5.5.3 显示核酸的吖啶橙快速染色法141

5.5.4 荧光Feulgen反应显示DNA141

5.5.5 显示染色体带和姐妹染色单体的荧光染色142

5.5.6 乙醛酸诱发单胺类荧光--SPG法142

5.5.7 硫代黄素荧光染色法143

5.6 荧光显微术中的问题及解决措施144

5.7 细胞荧光光度术144

5.7.1 应用Feulgen反应测定细胞DNA145

6 电镜细胞化学技术147

6.1 什么是电镜细胞化学技术147

6.2 电镜酶细胞化学的技术原则和特点149

6.2.1 固定剂和固定方法149

6.2.2 缓冲液152

6.2.3 捕获剂152

6.2.4 孵育及孵育液153

6.2.5 脱水和包埋(附包埋剂配方)155

6.2.6 修块、超薄切片和电子染色159

6.3 电镜标本和电镜细胞化学标本制作160

6.3.1 血细胞和其他悬液细胞的电镜标本制作160

6.3.2 酸性磷酸酶(AcP)161

6.3.3 碱性磷酸酶(ALP)(附Caulfield？酸后固定)163

6.3.4 芳基硫酸酯酶(AS)164

6.3.5 酸性醋酸酯酶(ANAE)166

6.3.6 丁酸酯酶(ANBE)167

6.3.7 过氧化物酶(peroxidasePO)168

6.3.8 细胞色素氧化酶169

6.3.9 琥珀酸脱氢酶(SDH)170

6.3.10 焦磷酸硫胺素酶(TPP)170

6.3.11 5＇-核苷酸酶和三磷酸腺铋酶(ATP酶)171

6.3.12 3＇.5＇-核苷酸磷酸二酯酶(3＇，5＇NP)173

6.3.13 腺苷酸环化酶(Adc)173

6.3.14 葡萄糖6-磷酸酶(G6-P)174

6.4 电镜免疫细胞化学技术175

6.4.1 辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体的戊二醛一步法176

6.4.2 HRP标记抗体的戊二醛二步法176

6.4.3 HRP标记抗体的过碘酸钠法177

6.4.4 免疫电镜酶标间接法显示细胞特异抗原177

6.4.5 包埋前酶标免疫电镜染色法178

6.4.6 包埋前PAP免疫电镜染色法179

6.4.7 包埋后酶标免疫电镜染色法180

6.4.8 水溶性包埋剂(K4M)包埋后染色法181

6.4.9 显示特异抗原的免疫金一酶双标记182

7 细胞的金属超微标记技术188

7.1 超微标记技术的分类及评价188

7.2.1 离子化铁蛋白技术190

7.2.2 阳离子化铁蛋白190

7.2 铁蛋白标记技术190

7.2.3 铁蛋白标记抗体的免疫电镜技术191

7.2.4 铁蛋白标记抗体的制备192

7.2.5 铁蛋白标记抗体显示细胞特异抗原192

7.2.6 铁蛋白标记凝集素进行亲和细胞化学193

7.2.7 铁蛋白标记凝集素染色法194

7.3 胶体金标记技术195

7.3.1 胶体金标记技术的优点与特性196

7.3.2 胶体金的制备197

4.1.3 活细胞检测198

7.3.3 胶体金标记物(金探针)的制备199

7.4 金标记物染色技术204

7.4.1 应用免疫金滤纸法鉴定抗体204

7.4.2 石蜡切片的免疫金(IGSS)染色206

7.4.3 蛋白A胶体金(PAG)的间接法染色207

7.4.4 冰冻切片的免疫金(IGSS)间接法染色208

7.4.5 环氧树脂半薄切片的免疫金染色208

7.4.6 免疫金银技术209

7.4.7 电镜包埋前免疫金染色法210

7.4.8 电镜包埋后免疫金染色法210

7.4.9 金标记胰高血糖素显示受体法211

8 细胞受体的显示和测定214

8.1 受体的研究方法概述214

8.1.1 受体的基本概念214

8.1.3 量效关系法研究受体215

8.1.2 定位受体的形态学方法215

8.1.4 放射性配基受体结合实验217

8.2 激素受体219

8.2.1 类固醇激素受体219

8.2.2 肽类激素受体226

8.2.3 甲状腺素受体229

8.3 介质受体229

8.3.1 胆碱能受体229

8.3.2 肾上腺素能受体230

8.4 免疫受体231

8.4.1 Fc受体231

8.4.2 补体受体233

8.4.3 E受体239

8.4.4 抗原受体241

8.4.5 白细胞介素受体243

8.5 凝集素受体245

8.5.1 HRP法显示ConA受体246

8.5.2 胶体金标记显示ConA受体247

9 复合糖类的凝集素亲和细胞化学248

9.1 糖蛋白的糖链结构248

9.1.1 N-糖苷链型糖链248

9.1.2 O-糖苷链型糖链250

9.2 显示糖链的亲和细胞化学技术251

9.3 复合糖的一般电镜显示法256

9.3.1 高碘酸-硫卡巴肼-蛋白银(PA-TCH-SP)染色法256

9.3.2 胶体铁染色法257

9.3.3 钌红染色法258

9.3.5 高铁二胺染色法259

9.3.6 卵白素生物素染色法显示唾液酸259

9.3.4 阳离子化铁蛋白染色法259

9.3.7 卵白素生物素法显示半乳糖残基260

9.3.8 硝酸镧标记染色法261

9.4 荧光素标记凝集素法262

9.4.1 FITC-凝集素染色法262

9.5 辣根过氧化物酶(HRP)标记法263

9.5.1 HPR凝集素复合物的制备263

9.5.2 HRP-凝集素光镜单染法264

9.5.3 HRP-凝集素光镜双染法264

9.5.4 HRP-凝集素电镜染色包埋前直接法265

9.5.5 HRP-凝集素电镜染色包埋前间接法265

9.5.6 HRP-凝集素电镜染色--包埋后直接法266

9.5.7 HRP-凝集素电镜染色--包埋后间接法267

9.6 抗凝集素抗体PAP法268

9.6.1 光镜染色法268

9.6.3 电镜包埋后染色法269

9.6.2 电镜包埋前染色法269

9.7 凝集素ABC法271

9.8 铁蛋白标记法273

9.8.1 铁蛋白标记凝集素的制备273

9.8.2 组织块包埋前染色法273

9.8.3 组织块包埋后染色法273

9.8.4 扫描电镜标本的制备273

9.9 胶体金标记凝集素染色法274

9.9.1 胶体金标记凝集素(G-ConA)包埋前染色274

9.9.2 G-GonA腹腔游离细胞染色法274

9.3.3 G-ConA包埋后染色275

9.9.4 胶体金-HRP双标凝集素染色法275

9.10 复合糖抗体染色法276

9.10.1 特异性糖蛋白的提取及抗体的制备、纯化276

9.10.2 特异性糖蛋白的免疫细胞化学染色276

9.11 糖脂的细胞化学277

9.11.2 神经苷脂GM1免疫荧光染色278

9.11.1 一般细胞化学染色278

9.11.3 酶标抗体染色279

9.11.4 A蛋白胶体金显示法279

9.11.5 标记生物毒染色法280

10 造血细胞的培养和测定技术282

10.1 造血干细胞与造血祖细胞282

10.1.1 造血干细胞282

10.1.2 造血祖细胞282

10.2 造血干细胞的测定技术288

10.2.1 CFU-S的测定技术288

10.2.2 标记染色体测定脾结节的形成290

10.2.3 脾结节移植法测定脾结节CFU-S291

10.3 造血干细胞培养的基本设备与条件292

10.3.1 实验室293

10.3.2 器皿的清洗与消毒293

10.3.3 培养用品的选择与准备296

10.4.1 肌条件培养液的制作301

10.4 特异性刺激因子的制备301

10.4.2 白细胞条件培养液的制备302

10.4.3 脾条件培养液的制备303

10.4.4 再障病人血清的制备304

10.5 造血祖细胞的培养技术304

10.5.1 造血祖细胞的培养步骤304

10.5.2 各类造血祖细胞的培养技术305

10.5.3 造血细胞体内扩散匣培养技术316

10.6 造血祖细胞培养技术的实际应用318

10.6.1 培养技术实际应用的范围318

10.6.2 培养技术实际应用的举例318

11 造血细胞极限稀释液体微培养及其应用324

11.1 极限稀释法原理324

11.1.1 计算细胞克隆形成率的计算机程序325

11.2.2 方法329

11.2 粒单系造血祖细胞(CFU-GM)液体微培养329

11.2.1 材料与试剂329

11.3 极限稀释法微孔池培养测定骨髓造血祖细胞331

11.3.1 材料与试剂331

11.3.2 形态学方法332

11.3.3 3H-TdR掺入法332

11.4 人T淋巴细胞克隆形成率的测定333

11.4.1 材料与试剂333

11.4.2 方法334

11.4.3 从人扁桃体制备T淋巴细胞生长因子(PHA-LCM，IL-2)335

11.4.4 IL-2的活性检定方法336

11.5 白血病细胞系克隆形成率的测定337

11.5.1 材料与试剂337

11.5.2 方法337

11.6.1 材料与试剂339

11.6 克隆细胞对抗肿瘤药物剂量反应曲线的测定339

11.6.2 方法340

11.7 3H-TdR自杀试验用于克隆形成细胞的细胞周期的测定341

11.7.1 材料与试剂341

11.7.2 方法342

11.8 人T淋巴细胞HGPRT基因位点突变率的测定343

11.8.1 材料与试剂344

11.8.2 方法344

12 细胞遗传学技术及其应用345

12.1 导论345

12.2 细胞培养、细胞分裂及其处理346

12.2.1 标本来源及取材346

12.2.2 细胞培养条件与时间347

12.2.3 细胞生长刺激因子348

12.2.4 分裂细胞的累积349

12.2.5 高分辨技术349

12.3.1 低渗处理350

12.3 细胞的收集制片350

12.3.2 细胞固定351

12.3.3 制片351

12.3.4 细胞的贮放及片龄352

12.3.5 普通染色标本及其镜检353

12.4 分带技术353

12.4.1 G分带353

12.4.2 Q分带354

12.4.3 R分带和T分带354

12.4.4 C分带354

12.4.5 N分带354

12.4.6 G11分带354

12.4.7 核型分析356

12.4.8 染色体分析细胞类型的确定359

12.5.1 概论360

12.5 溴脱氧尿苷(Brd-U)掺入技术360

12.5.2 姐妹染色单体交换(SCE)361

12.5.3 细胞动力学测定362

12.5.4 晚复制区及BrdU掺入显示R带364

12.5.5 胸苷不对称364

12.6 染色体脆性部位364

12.6.1 概论364

12.6.2 叶酸敏感脆性部位的检查365

12.6.3 远霉素A诱发的脆性部位365

12.6.4 脆性部位的检查及其意义366

12.7 染色体预凝聚366

12.7.1 染色体预凝集的现象及其意义366

12.7.2 操作程序、分离细胞与细胞融合术367

12.8 染色体分带技术在血液学中的应用369

12.8.1 染色体多态369

12.7.3 G2期细胞的累积与G期细胞染色体分带369

12.8.2 脆性部位370

12.8.3 核型分析372

12.9 注释380

13 细胞光度测定与定量分析382

13.1 现代细胞分析、定量技术简介382

13.1.1 显微分光光度计与图像分析仪382

13.1.2 流式细胞计的原理与基本结构383

13.1.3 细胞光度计的应用范围385

13.2 单细胞内DNA定量测定386

13.2.1 DNA图型构成及分析386

13.2.2 抗生素类染色法388

13.2.3 菲啶类染色法389

13.2.4 双间二氮茚类染色法390

13.3 同步测定单细胞的两种或两种以上物质391

13.3.1 吖啶橙染色测定两种核酸法及其分析391

13.3.3 蛋白质染色法395

13.3.2 HO33342与派洛宁y双染色方法395

13.3.4 线粒体染色法396

13.3.5 过氧化酶染色法397

13.3.6 非特异性酯酶染色法398

13.3.7 硝基蓝四氮唑(NBT)染色法399

13.4 染色体核型分析技术399

13.5 细胞膜表面抗原的检测方法及用途401

13.5.1 直接免疫荧光标记测定401

13.5.2 间接免疫荧光标记测定402

13.5.3 用全血作免疫荧光标记测定402

13.5.4 免疫荧光与DNA双标记测定402

13.6 细胞纯化及细胞亚群分离技术404

13.6.1 FCM分类器(FACS)的应用404

13.6.2 细胞淘洗技术405

13.7.1 癌基因探针与PI双标记测定409

13.7 FCM在分子生物学中的应用--肿瘤基因的检测409

14 放射自显影和细胞动力学研究技术412

14.1 放射自显影的意义和分类412

14.2 有关的技术理论知识和材料413

14.2.1 放射性核素415

14.2.2 放射性核素标记化合物415

14.2.3 自显影常用的感光材料416

14.2.4 潜影的形成与消褪418

14.2.5 显影和定影418

14.2.6 自显影的本底418

14.2.7 示踪剂剂量与曝光时间420

14.3 技术方法和结果分析420

14.3.1 各种自显影标本的制备要点420

14.3.2 光镜自显影乳胶浸膜法421

14.3.3 光镜自显影融裱法422

14.3.4 光镜自显影绞链接触法422

14.3.5 电镜自显影浸膜法423

14.3.6 电镜自显影金属环法424

14.4 细胞动力学及其参数与术语425

14.5 细胞动力学参数的测定方法427

14.5.1 标记有丝分裂百分率法427

14.5.2 3H-TdR低高浓度两次脉冲标记法429

14.5.3 3H-TdR脉冲标记一次取材法430

14.5.4 3H-TdR连续标记法431

14.5.5 3H-TdR标记细胞迁移追踪法431

14.6 细胞动力学原理在肿瘤防治中的应用432

14.6.1 增生性病变癌变的预测432

14.6.2 肿瘤细胞的同步化、周期化治疗433

14.6.3 肿瘤治疗效果的预测433

14.6.4 肿瘤预后的预测434

14.7 DNA修复合成试验434

15.1 低温生物学及其内容437

15 低温生物冻存技术437

15.2 低温生物技术中的一些关键问题438

15.2.1 低温损伤的机制438

15.2.2 抗冻剂439

15.2.3 最佳储存温度439

15.2.4 最佳降温程序和速度439

15.2.5 冷冻标本的复温440

15.3.2 浓缩红细胞的保存442

15.3.1 红细胞全血4℃保存法442

15.3 血细胞的冻存法442

15.3.3 红细胞慢冻深低温保存443

15.3.4 红细胞快冻深低湿保存444

15.3.5 血小板的分离445

15.3.6 血小板的室温保存446

15.3.7 血小板的深低温保存446

15.3.8 淋巴细胞的低温冻存446

15.3.9 骨髓造血(干)细胞的冻存448

15.3.10 杂交瘤细胞的冷冻保存449

15.3.11 贴壁细胞株的传代及冻存450

16 细胞融合杂交及单克隆抗体技术453

16.1 细胞融合杂交和单克隆抗体的原理和制备流程453

16.2 建立杂交瘤细胞所用的瘤细胞系455

16.2.1 浆细胞瘤株和其它榴株的特点455

16.2.2 浆细胞瘤株的培养方法455

16.3 鼠免疫B淋巴细胞的制备法456

16.4 细胞融合术和融合杂交细胞的筛选458

16.4.1 聚乙二醇(PEG)融合杂交细胞法459

16.4.2 饲养细胞的制备460

16.4.3 仙台病毒诱导细胞融合法461

16.4.4 仙台病毒鸡胚培养法462

16.5 杂交瘤细胞克隆化技术463

16.5.1 极限稀释法进行克隆化463

16.5.2 软琼脂培养进行克隆化464

16.6.1 单克隆细胞的扩增法465

16.5.3 其它克隆化技术465

16.6 杂交瘤细胞的扩增和抗体制备465

16.6.2 单克隆抗体的制备466

16.6.3 单克隆抗体的处理和保存466

16.6.4 单克隆抗体的质量检测467

17 核酸的分子杂交469

17.1 核酸的理化性质与分子杂交的原理469

17.2 标记探针的方法471

17.2.1 缺口翻译法472

17.2.2 5＇末端标记法475

17.3 液相杂交476

17.3.1 同位素标记DNA探针与RNA的杂交477

17.3.2 同位素标记DNA探针与非标记DNA的杂交477

17.4 固相杂交478

17.4.1 打点杂交的直接点样法478

17.4.2 DNA的吸印转移法(southern blot)480

17.4.3 RNA的吸印转移法(northern blot)481

17.4.4 硝酸纤维素膜固相杂交482

17.5 原位杂交485

17.5.1 组织制备485

17.5.2 杂交487

17.5.3 杂交后结果的显示和分析489

17.5.4 原位杂交技术的新进展491

附录 常用试剂的配制494

附1 Hanks溶液494

附2 MEM(Eagle)培养液495

附3 Gey溶液496

附4 RPMI1640液497

附5 TC199培养液497

附6 醋酸盐缓冲液497

附7 Tris缓冲液498

附8 二甲胂酸盐缓冲液499

附9 碳酸-重碳酸盐缓冲液500

附10 柠檬酸盐缓冲液501

附11 柠檬酸--磷酸缓冲液501

附12 顺丁烯二酸盐缓冲液(Maleate-buffer)502

附13 磷酸盐缓冲液(PB)503

附14 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)505

附15 Tris顺丁烯二酸盐缓冲液506

附16 巴比妥缓冲液507

附17 Tris缓冲氯化铵溶红细胞液508

附18 巴比妥醋酸缓冲液508

附19 任氏液508

附20 0.1N盐酸509

附21 缓冲锇酸固定液509

附22 硫酸洗液509

附23 Maclluaine缓冲液510

附24 Earle溶液510