《免疫细胞化学及其在生物学和医学中的应用》求取 ⇩

第一章　绪论1

一、免疫细胞化学发展简史1

二、免疫细胞化学的基本原理4

三、免疫细胞化学的染色方法4

（一）直接法（二）间接法（三）不标记抗体法（桥联法）（四）过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法（五）亲和素-生物素复合物（ABC）法（六）标记抗原法（七）半抗原标记法（八）葡萄球菌A蛋白（SPA）法四、免疫细胞化学方法学的特征6

（一）特异性（二）敏感性（三）应用广泛性（四）快速性（五）定位的精确性五、免疫细胞化学反应的必要条件8

（一）抗原（二）抗体（三）标记物（四）对照六、存在的问题9

（一）自发性或内源性非特异性染色反应（二）固定和制片等操作过程引起抗原反应性的下降和细胞形态学的损害（三）非特异性反应对特异性免疫染色的干扰参考文献11

第二章　免疫试剂的制备13

一、抗血清的制备13

（一）抗原（二）免疫动物（三）佐剂（四）免疫途径与剂量（五）免疫动物的方法二、抗体和免疫球蛋白20

（一）抗体的基本结构（二）免疫球蛋白的分类三、抗体的分离和纯化25

（一）盐析法（二）层析和过滤法（三）各类免疫球蛋白的分离和纯化（四）特异性抗体球蛋白的分离方法四、抗体的鉴定39

（一）双向免疫扩散试验（二）免疫电泳试验参考文献43

第三章　单克隆抗体的制备44

一、原理45

二、方法48

（一）免疫动物（二）骨髓瘤细胞的选择（三）脾细胞和骨髓瘤细胞的融合（四）克隆化培养（五）杂交瘤纯系细胞扩大培养和单克隆抗体的制备（六）杂交瘤细胞的保存和复苏（七）单克隆抗体的分离和纯化（八）抗体活力的检测参考文献55

第四章　免疫荧光技术56

一、荧光的性质和特征56

二、自发荧光59

三、荧光色素60

（一）荧光色素的性质（二）适用于免疫学染色的荧光色素四、荧光物质的制备、纯度测定和贮存65

五、荧光色素和蛋白质的结合65

六、标记方法67

（一）异硫氰酸荧光素（FTTC）的标记（二）四乙基罗达明（RB200）的标记（三）二甲基氨基-萘-5-磺酸（DANS）的标记（四）四甲基异硫氰酸罗达明（TMRITC）的标记七、标记抗体的纯化70

（一）未结合荧光色素的去除（二）过标记和未标记免疫球蛋白的去除（三）组织制剂的吸收处理八、特异性纯化标记抗体74

九、标记抗体的鉴定75

（一）标记抗体的免疫化学性质鉴定（二）标记抗体的免疫学性质鉴定（三）标记抗体的特异性染色效价测定十、标记抗体的贮存78

十一、标本的制备79

（一）涂片和印片的制备（二）冰冻切片（三）冰冻干燥切片（四）石蜡切片（五）细胞培养物的制片十二、标本的固定81

（一）固定剂（二）固定的条件（三）各种抗原的固定例示十三、固定标本的贮存86

十四、免疫荧光染色87

（一）常用的染色方法（二）特殊的染色方法十五、特异性试验94

十六、标本的封固和保存96

十七、荧光显微镜96

（一）光源（二）滤光系统（三）荧光显微镜十八、结果的纪录102

参考文献102

第五章　免疫铁蛋白法105

一、标记试剂105

（一）铁蛋白（二）结合剂（三）免疫球蛋白二、铁蛋白与免疫球蛋白的结合108

（一）XC或TC的二步结合法（二）戊二醛结合法三、结合物的纯化111

（一）硫酸铵盐析法（二）超速离心法（三）密度梯度离心法四、结合物的鉴定113

（一）双扩散试验（二）环状沉淀反应五、标本的制备114

六、固定115

七、染色方法117

（一）直接法（二）间接法（三）特异性试验八、双重标记抗体（铁蛋白和荧光色素）119

九、杂交抗体120

（一）原理（二）抗铁蛋白抗血清的制备及其抗体球蛋白的分离（三）特异性抗血清的制备（四）抗体片段［F(ab')2］的制备和杂交参考文献123

第六章　酶免疫细胞化学技术125

一、酶标记抗体法128

（一）标记试剂（二）标记方法（三）辣根过氧化物酶（HRP）结合物的纯化（四）结合物的定性和定量鉴定（五）结合物中HRP与免疫球蛋白的定量和它们间的克分子比值的计算（六）酶标记抗体的贮存（七）底物（八）不同方法制备的结合物的比较二、不标记抗体过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法152

（一）最初的不标记抗体法（二）PAP法三、组织标本的制备162

（一）固定（二）组织脱水和包理四、染色168

（一）光镜观察用的酶标记抗体直接染色法（二）光镜观察用的酶标记抗体间接染色法（三）光镜观察用的PAP染色法（四）塑料半薄切片染色法（五）电镜观察用的免疫酶染色法参考文献181

第七章　亲和素-生物素的免疫细胞化学技术184

一、原理185

二、材料186

（一）生物素（二）亲和素（三）标记物（四）抗血清三、标记方法188

（一）生物素化蛋白质（二）标记亲和素四、亲和素-生物素系统（ABS）免疫细胞化学检测类型190

（一）生物素化抗体-标记亲和素（或标记链亲和素）间接法（二）亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法五、特异性试验194

（一）阴性对照（二）阳性对照（三）内源性酶和内源性生物素的去除参考文献195

第八章　免疫金技术197

一、胶体金的性质198

二、胶体金的制备199

（一）白磷还原法（二）白磷还原改良法（三）柠檬酸钠还原法（四）柠檬酸钠-鞣酸还原法三、胶体金的鉴定202

四、免疫金探针的制备203

（一）待标记蛋白质的准备（二）确定标记时所需要的最适量蛋白质五、免疫球蛋白-胶体金结合物的制备205

（一）免疫球蛋白（IgG）的准备（二）免疫球蛋白最适量的确定（三）胶体金标记免疫球蛋白（四）胶体金-免疫球蛋白结合物的纯化六、葡萄球菌A蛋白-胶体金结合物的制备207

七、免疫金探针的鉴定208

八、组织标本的制备208

九、胶体金免疫光镜染色209

（一）间接染色法（二）免疫金-银（IGSS）法十、胶体金免疫电镜染色213

（一）包埋前免疫染色（二）包埋后免疫染色（三）包埋后双重标记染色参考文献216

第九章　双重标记染色法217

一、双重免疫荧光法217

二、双重免疫酶技术218

（一）单酶法（二）双酶法三、双重免疫荧光法与双重免疫酶法的比较224

四、双重免疫酶法操作步骤224

（一）过氧化物酶标记抗体多重染色法（二）不同种属动物特异性抗体的双重染色法参考文献226

第十章　亲和细胞化学228

一、标记凝集素定位的类型229

（一）直接法（二）间接法二、标记凝集素的制备232

（一）荧光标记凝集素（二）酶标记凝集素的制备三、标记糖的制备234

四、酶消化处理解除被封闭的糖反应位点234

（一）胰蛋白酶消化（二）神经氨酸酶消化五、对照试验235

（一）阳性对照（二）阴性对照考参文献236

第十一章　免疫细胞化学在微生物学中的应用237

一、在细菌学中的应用237

（一）金黄色葡萄球菌（二）链球菌（三）淋病奈瑟氏球菌（四）脑膜炎双球菌（五）肺炎双球菌（六）志贺氏菌属（七）脆弱类杆菌（八）沙门氏菌（九）巴斯德氏菌（十）布鲁氏杆菌（十一）流行性感冒杆菌（十二）百日咳博德特氏杆菌（十三）棒状杆菌（十四）分枝杆菌（十五）炭疽杆菌（十六）梭状芽胞杆菌（十七）军团菌（十八）霍乱弧菌（十九）梅毒螺旋体（二十）钩端螺旋体（二十一）衣原体二、在病毒学中的应用255

（一）脊髓灰质炎病毒（二）柯萨奇病毒（三）口蹄疫病毒（四）委内瑞拉马脑脊髓炎病毒（五）日本脑炎病毒（六）登革热病毒（七）肾综合症出血热病毒（八）Borna脑炎病毒（九）流感病毒（十）腮腺炎病毒（十一）新城鸡瘟病毒（十二）副流感病毒（十三）麻疹病毒（十四）犬瘟热病毒（十五）牛瘟病毒（十六）狂犬病病毒（十七）猿猴空泡病毒（十八）腺病毒（十九）单纯疱疹病毒（二十）水痘——带状疱疹病毒（二十一）呼吸道合胞体病毒（二十二）巨细胞病毒（二十三）小鼠白血病病毒（二十四）E.B.病毒（二十五）多瘤病毒参考文献281

第十二章　自身免疫病的免疫细胞化学研究286

一、非器官特异性自身抗体287

（一）抗核抗体（二）抗细胞质抗体二、器官特异性自身抗体292

（一）抗甲状腺抗体（二）重症肌无力症病人的自身抗体（三）抗胰岛细胞的自身抗体（四）抗肾上腺皮质的自身抗体（五）抗胃壁细胞抗体和抗胃泌素抗体（六）抗心肌抗体（七）肾小球性肾炎（八）其它器官特异性自身抗体参考文献299

第十三章　免疫细胞化学在细胞生物学中的应用301

一、抗体形成细胞发育的研究301

二、酶的定位305

（一）氧化还原酶（二）水解酶（三）其它酶的研究三、细胞内其它成份的研究311

参考文献315

第十四章　细胞骨架的免疫细胞化学研究317

一、微丝317

二、微管320

三、中间丝321

（一）角蛋白（二）波形纤维蛋白（三）结蛋白（四）神经丝蛋白（五）胶质纤维酸性蛋白四、中间丝与肿瘤病理学326

（一）角蛋白在肿瘤病理诊断中的应用（二）结蛋白和波形纤维蛋白在肿瘤诊断中的应用（三）胶质纤维酸性蛋白和神经丝蛋白在肿瘤诊断中的应用参考文献333

第十五章　内分泌学的免疫细胞化学研究336

一、脑垂体336

（一）促性腺激素细胞（二）促甲状腺激素细胞（三）促生长激素细胞（四）促肾上腺皮质激素细胞（五）催乳素细胞二、胚胎发育期间垂体中不同的激素细胞的分化及其在脑中的分布346

三、胰岛346

四、甲状腺349

参考文献349

第十六章　单胺类神经递质的免疫细胞化学研究352

一、儿茶酚胺354

（一）多巴胺（二）去甲肾上腺素（三）肾上腺素二、组织胺360

三、5-羟色胺361

参考文献370

第十七章　神经肽的免疫细胞化学372

一、催产素和加压素372

二、黄体化激素释放激素377

三、促甲状腺激素释放激素380

四、生长抑素382

五、P物质385

六、胆囊收缩素389

七、血管活性肠肽392

八、脑啡肽和内啡肽395

九、胰多肽和多肽YY398

参考文献399

第十八章　肿瘤标记404

一、激素405

（一）人绒毛膜促性腺激素（二）人胎盘生乳素（三）垂体激素（四）甲状腺激素（五）胰腺内分泌细胞肿瘤的激素二、酶414

（一）碱性磷酸酯酶（二）前列腺酸性磷酸酯酶（三）组织胺酶（四）溶菌酶（五）神经元特异性烯醇化酶（六）其它酶三、肿瘤胚胎性蛋白质418

（一）癌胚抗原（二）甲胎蛋白四、免疫活性细胞及其肿瘤的标记421

（一）淋巴样组织细胞（二）淋巴组织肿瘤五、肿瘤相关抗原426

参考文献430