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第一章 总论1

第一节 有关免疫学的基本概念2

一、抗原2

1.异物性2

2.物理性状3

3.化学组成4

4.抗原的特异性4

二、抗体5

三、补体7

第二节 免疫细胞化学技术概述7

一、抗体的制备7

二、组织固定、包埋和标本制作8

三、免疫染色10

四、免疫细胞化学结果的判断13

一、蛋白质17

第二章 免疫血清的制备17

第一节 免疫原的种类17

二、多糖质18

三、核酸18

第二节 免疫原的制备19

一、组织抗原19

二、微生物抗原19

三、免疫球蛋白抗原19

四、载体抗原20

1.载体蛋白20

2.偶联剂21

五、免疫原的鉴定22

1.蛋白质抗原22

三、途径23

二、动物23

第三节 制备免疫血清的条件23

2.微生物抗原23

一、抗原23

四、剂量24

五、次数和间隔24

六、效价测定25

七、佐剂25

第四节 几种常用免疫血清的制备方法26

一、兔抗人r-球蛋白免疫血清制备法26

二、兔抗豚鼠C3球蛋白免疫血清制备法26

三、羊抗兔r-球蛋白免疫血清制备方法27

四、兔抗人SIgA血清的制备法27

五、抗IgG和抗IgM的免疫血清制备法27

六、抗正常人全血清的免疫血清制备法27

2.不完全抗体28

3.杂交抗体28

第五节 抗体28

1.完全抗体28

一、抗体的种类28

4.单克隆抗体29

二、抗体的纯化30

1.盐析法30

2.DEAE-纤维素层析法32

3.琼脂糖(Agarose)免疫吸附法33

三、抗体的鉴定方法34

1.原理35

2.琼脂处理35

3.琼脂板制备35

6.染色36

4.加样和扩散36

5.结果分析36

四、抗体的保存37

第三章 免疫荧光细胞化学技术38

第一节 免疫荧光细胞化学的原理38

一、直接法39

1.检查抗原法39

2.检查抗体法40

二、间接法40

1. 检查抗体法(夹心法)40

2. 检查抗体法40

3.检查抗原法40

2.间接检查组织内抗原法41

四、双重免疫荧光标记法41

1.直接检查组织内免疫复合物法41

三、补体法41

五、对照试验42

1.直接法42

2.间接法42

3.补体法42

第二节 荧光抗体的制备44

一、荧光素44

1.异硫氰酸荧光素(FITC)44

2.四乙基罗达明(RB200)45

3.四甲基异硫氰酸罗达明(TMRITC)47

二、荧光素标记抗体的方法47

1.FITC标记抗体的方法47

2.四乙基罗达明标记抗体方法51

3.四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法52

1.染色特异性和敏感性的测定53

三、荧光抗体的质量控制53

2.F/P比值的测定54

四、荧光抗体的保存56

第三节 免疫荧光细胞化学染色方法56

一、标本制作56

二、荧光抗体染色方法56

1.直接法56

2.间接法57

3.补体法58

4.膜抗原荧光抗体染色法59

5.双重染色法59

第四节 荧光显微镜检查法60

一、荧光显微镜60

三、荧光抗染色法60

6.荧光抗体再染色法60

1.光源61

2.滤色系统62

3.反光镜65

4.聚光器65

5.物镜66

6.目镜66

7.落射光装置66

二、荧光显微镜标本制作要求67

1.载玻片67

2.盖玻片67

3.标本67

4.封裱剂67

5.镜油67

四、荧光图象的记录方法68

三、使用荧光显微镜的注意事项68

一、非特异性染色的主要因素69

第五节 非特异性染色的消除法69

二、清除非特异性染色的方法70

1.动物脏器粉末吸收法70

2.透析法71

3.葡聚糖凝胶G50柱层析法72

4.DEAE纤维素柱层析法72

5.荧光抗体稀释法73

6.纯化抗原法73

7.纯化抗体法-免疫吸收法74

8.伊文氏兰(Evans blue)衬染法74

第四章 免疫酶细胞化学77

第一节 酶标抗体法77

一、酶的种类及其特点77

1.偶联剂80

二、酶标抗体的制备80

2.戊二醛标记法81

3.过碘酸盐氧化法83

三、酶标抗体的纯化85

1.多聚体的分离85

2.非标记抗体的分离85

3.亲和层析86

四、染色方法、原理及步骤86

1.染色方法及原理86

2.间接染色法步骤及优点88

五、酶标抗体的改进89

1.HRP标记抗体片段技术89

2.两种酶标记抗体的放大法90

第二节 非标记抗体酶法91

1.基本原理92

一、酶桥法92

2.染色步骤93

二、PAP法94

1.PAP的制备及特征94

2.PAP法基本原理及染色程序96

3.操作注意事项101

4.血清特异性检验105

5.PAP法的评价106

6.PAP法的改进107

7.PAP双重标记法109

8.PAP法在铺片中的应用111

第五章 亲和组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展115

1.ABC技术116

二、几种抗生物素-生物素染色法116

一、基本原理116

第一节 抗生物素-生物素免疫染色法116

2.BRAB技术119

3.LAB技术120

第二节 葡萄球菌蛋白A(SPA)121

一、SPA的性质121

二、SPA的应用123

三、SPA在免疫细胞化学染色中的应用124

1.SPA-HRP用于间接法步骤125

2.SPA-HRP用于PAP法操作步骤125

3.SPA-HRP的制备126

第三节 凝集素127

一、凝集素的特性128

二、凝集素的应用128

1.直接法130

三、凝集素在免疫细胞化学中的应用130

3.糖-凝集素-糖法131

2.间接法131

四、HRP标记凝集素法及抗凝集素抗体的制备134

1.HRP标记凝集素法134

2.抗凝集素抗体的制备135

第四节 免疫细胞化学技术的某些新进展136

一、光镜免疫金技术136

1.有关胶体金的基本概念137

2.免疫金技术137

二、免疫金银技术138

1.基本原理138

2.银显影液的配制139

3.染色步骤140

三、半抗原交联抗体法142

4.评价142

四、分子杂交免疫细胞化学技术144

第六章 电子显微镜免疫细胞化学技术152

一、电子显微镜免疫细胞化学技术概述152

1.组织固定与取材152

2.免疫染色153

3.包埋155

4.对照试验161

二、免疫铁蛋白技术162

1.基本原理162

2.铁蛋白的提取和纯化162

3.铁蛋白与免疫球蛋白的结合163

4.电镜标本的制备方法164

1.基本原理165

三、免疫酶细胞化学技术165

2.电镜标本制备方法166

四、免疫电镜胶体金标记法168

1.基本原理与评价168

2.胶体金标记抗体液的制备169

3.电镜水平的免疫金染色法174

4.胶体金标记蛋白A技术(PAg法)177

5.胶体金双标记技术179

五、凝集素电镜标记技术180

第七章 蛋白质和多肽激素的放射免疫测定185

一、RIA的基本原理185

2.抗体187

4.B与F的分离技术187

3.标记抗原187

1.标准品187

二、RIA建立的基本条件187

5.放射性探测仪器188

三、放射性碘标技术188

1.125I与131I的特性188

2.放射性碘可标记的基团188

3.常用标记方法190

4.标记抗原的分离纯化192

5.标记率和放射性比度的计算196

6.125I-抗原的免疫活性鉴定197

7.125I-抗原的贮存198

四、RIA的抗血清198

1.抗血清的来源198

2.抗血清的选择198

3.抗血清的质量鉴定200

五、标准曲线206

2.标准曲线的制做207

1.RIA的反应系统207

3.标准曲线的免疫动力学解释209

4.标准曲线的斜率及其影响因素211

六、样品制备及其测定214

1.组织样本制备方法214

2.血样本制备215

3.脑脊液的制取215

4.样品测定加样量的确定216

5.样品测定217

七、RIA的质量控制及方法学评价217

2.质量控制类别218

3.“效点系统”评分法218

1.质量控制的目的218

八、RIA方法的缺点223

第八章 免疫细胞化学技术在临床病理学中的应用225

第一节 免疫细胞化学技术在淋巴网状组织肿瘤的诊断与鉴别诊断方面的应用226

一、正常淋巴网状组织免疫细胞化学226

二、淋巴网状组织肿瘤的免疫学分型231

1.B细胞淋巴瘤231

2.T细胞淋巴瘤231

3.组织细胞与网状细胞肉瘤232

4.组合型淋巴瘤232

5.何杰金氏病232

6.恶性组织细胞增生症233

三、鉴别诊断234

1.恶性淋巴瘤与假性淋巴瘤鉴别234

2.恶性淋巴瘤与圆细胞未分化癌或肉瘤鉴别234

第二节 中间丝抗体在临床病理中的应用235

3.确定少见部位的原发淋巴瘤诊断235

一、抗角蛋白抗体237

二、抗波纹蛋白抗体238

三、抗结蛋白抗体239

四、抗胶质纤维酸性蛋白抗体239

五、抗神经丝抗体240

第三节 S-100蛋白免疫组织化学标记在临床病理诊断中的应用241

一、S-100蛋白的生物特性及其在正常组织中的分布241

二、S-100蛋白在肿瘤诊断中的应用243

1.中枢神经系统肿瘤243

2.雪旺氏细胞肿瘤244

3.黑色素细胞肿瘤245

4.APUD细胞肿瘤246

5.其它非神经脊起源组织肿瘤247

三、肿瘤间质中反应性S-100蛋白阳性细胞的意义248

第四节 凝集素组织化学在肿瘤病理学中的应用252

一、概述252

二、凝集素受体的标记方法253

三、凝集素在肿瘤病理学的应用254

1.凝集素作为组织分化成熟的标记254

2.凝集素作为特异性细胞类型的标记255

3.肿瘤细胞的凝集素受体改变255

4.不同种瘤的分化标志257

5.肿瘤生物学行为的标志258

第五节 肌动蛋白在肿瘤病理诊断中的应用265

一、梭形细胞肿瘤的鉴别诊断265

二、肌上皮细胞的病理学意义266

三、横纹肌肉瘤的诊断267

第六节 第Ⅷ因子相关抗原在临床病理诊断中的应用267

三、良性肿瘤268

一、正常组织268

二、炎性病变268

四、恶性肿瘤269

第七节 免疫细胞化学在内分泌肿瘤诊断中的应用270

一、垂体前叶腺瘤270

二、胰岛细胞瘤271

三、甲状腺肿瘤271

四、性类固醇激素受体检测及其应用271

第九章 免疫细胞化学在微生物学和寄生虫学中的应用284

第一节 在细菌学中的应用284

一、甲组溶血性链球菌的快速检查法288

二、脑膜炎双球菌的快速检查法289

三、致病性大肠杆菌的快速检查法289

五、钩端螺旋体的检查法290

四、其他细菌290

六、梅毒螺旋体的检查法291

第二节 在病毒学中的应用293

一、病毒抗原定位293

二、病毒感染过程294

三、肿瘤与病毒294

四、病毒计数294

五、病毒的快速诊断295

1.病毒的检查297

2.抗体的检查298

第三节 在寄生虫学中的应用298

二、疟疾299

3.荧光抗体299

4.检查方法299

2.待检血清299

1.抗原299

一、血吸虫病299

1.抗原标本300

2.待检血清300

3.荧光抗体300

4.染色方法300

5.结果判断300

第十章 免疫细胞化学在神经科学中的应用302

一、确定神经递质的性质、定位和分布302

二、探查和发现新的神经递质305

三、追踪神经束的行径及其投射区306

四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞307

五、研究神经递质的超微结构定位309

六、神经递质共存的研究313

七、个体和种族发育的研究315

八、与神经组织培养技术相结合进行神经生物科学的研究316

九、应用于受体的研究317

十、神经系统的机能研究318

第十一章 免疫细胞化学技术与放射免疫分析在临床神经精神病学中的应用322

一、中枢神经系统感染323

1.脑炎和脑膜炎323

2.亚急性硬化性全脑炎325

二、脑肿瘤325

三、脑血管疾病327

四、脑外伤330

五、脑髓鞘疾病331

1.多发性硬化331

2.急性坏死性出血性脑病331

六、锥体外系疾病331

1.震颤麻痹331

2.亨廷顿舞蹈病332

七、癫痫333

八、肌肉疾病334

1.多发性肌炎和皮肌炎334

2.肌红蛋白尿症334

3.重症肌无力症335

4.肌营养不良症336

九、痛症336

十、痴呆338

十一、精神病339

第十二章 免疫细胞化学技术在自身免疫性疾病中的应用343

第一节 自身抗体的免疫细胞化学检查法345

一、常规检查法345

三、荧光显微镜检查346

第二节 免疫细胞化学技术在自身免疫性疾病诊断中的应用346

二、对照试验346

一、抗核抗体347

1.抗核抗体的荧光形态及临床意义350

2.ANA的滴度与病情的关系352

二、双莲DNA抗体(dsDNA)的检测353

1.用马疫锥虫抗原检测抗dsDNA抗体法353

2.用短膜虫抗原检测抗dsDNA抗体法354

3.用酸洗脱鼠肝细胞抗原检测dsDNA抗体法354

三、抗核仁抗体的检测法355

四、抗组蛋白抗体的检测法355

五、抗着丝点抗体的检测356

六、抗甲状腺自身抗体的检测358

七、平滑肌抗体的检测360

八、肝细胞膜抗体的检测362

十、胃壁细胞抗体的检测364

九、线粒体抗体的检测364

十一、胃泌素细胞抗体的检测366

十二、胰岛细胞抗体的检测366

十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测367

十四、抗皮肤成分自身抗体的检测368

十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测370

十六、抗横纹肌自身抗体的检测371

十七、肾上腺自身抗体的检测371

十八、类风湿因子的检测371

十九、其他自身抗体的检测372

第十三章 免疫细胞化学与图像分析376

一、应用范围378

二、灰度379

三、面积与长度381

四、图像分析仪工作程序382

1.标本成像383

2.图像获取383

3.加强图像383

4.检测383

5.阴影校正385

6.测量386

7.资料分析386

8.其它事项386

9.没有图像分析仪可否进行图像分析？387

10.实例介绍388

11.图像分析与体视学390

五、图像分析仪的主要生产厂家简介393

第十四章 流式细胞光度计在免疫细胞化学中的应用397

第一节 概述397

第二节 细胞分析和分离的基本原理399

第三节 FCM对免疫荧光染色的周围血白细胞的分析401

一、细胞的制备402

1.全血染色后溶解红细胞404

2.红细胞被溶解后再染白细胞405

3.用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出单个核细胞405

4.荧光标记抗体的细胞染色406

二、操作基本方法和图像分析408

1.使用前的调试和校准408

2.标本分析410

三、淋巴细胞亚群的测定及其在临床医学中的意义416

1.T淋巴细胞亚群的测定：百分数、绝对值以及CD4/CD8比值418

2.艾滋病以及HTLV-Ⅲ感染419

3.白血病和淋巴瘤的表现型421

4.FCM对正常B细胞和B细胞肿瘤的分析423

附录：免疫细胞化学常用试剂介绍430

一、固定剂430

1.4%多聚甲醛-0.1M磷酸盐缓冲液430

2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠431

3.Bouin s液及改良Buin s液431

4.Zambonis s(Stefanini s)液432

5.PLP液432

6.Karnovsky s液433

7.0.4%对苯酯434

8.PFG液434

9.碳二亚酰胺-戊二醛液435

10.四氧化锇436

二、缓冲液437

1.0.2M磷酸盐缓冲液437

3.Karasson-Schwlt s磷酸盐缓冲液438

2.0.01M磷酸盐缓冲生理盐水438

4.0.5MTris-HCl缓冲液439

5.Tris缓冲生理盐水439

6.Triton-TBS(-PBS)439

7.0.1M二甲胂酸钠缓冲液440

8.几种常用的不同pH值缓冲液配制表440

三、显色液446

1.DAB显色液446

2.4-氯-1-萘酚显色液446

3.3-氨基-9-乙基卡唑(AEC)显色液447

4.TMB显色液448

四、粘合剂449

1.铬矾明胶液449

1.甘油-TBS及甘油-PBS450

2.甘油-明胶(冻)450

3.多聚赖氨酸450

五、封固剂450

2.甲醛-明胶液450

3.液体石蜡451

4.DPX451

六、酶消化液451

1.0.1%胰蛋白酶451

2.0.4%胃蛋白酶451

3.0.06%Pronase452

七、其它452

1.蔗糖溶液452

2.Triton X-100453

3.甲醇-H2O2液454

4.常用生理盐液454

简字表457