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目录1

第一部分　体外免疫反应1

第一章　小鼠细胞悬液的制备2

1.1 引言2

1.2　脾细胞3

1.3　正常腹腔细胞4

1.4　硫羟乙酸盐刺激的腹腔细胞5

1.5　胸腺细胞7

1.6　受训的胸腺细胞8

1.7　抗考的松的胸腺细胞9

1.8　骨髓细胞9

1.9　淋巴结细胞10

1.10　用细胞计数板做细胞计数12

1.11　用台盼蓝拒染法测定细胞活力14

1.12　用伊红Y拒染法测定细胞活力15

1.13　用苯胺黑拒染法测定细胞活力16

1.14　用二乙酸盐荧光素测定细胞活力17

1.15　用吖啶橙-溴化乙啶测定细胞活力19

1.16　用低渗休克法溶解红细胞20

1.17　用Tris-NH4Cl缓冲液溶解红细胞21

1.18　用溶血性Gey氏溶液溶解红细胞21

1.19　用蔗聚糖-泛影葡胺离心法22

1.20　死细胞凝集法23

1.21　用玻璃棉柱过滤法去除死细胞及细胞碎片24

1.22　用胎牛血清离心法25

第二章　体液反应的产生26

2.1　绪言26

2.2　悬浮培养中的初次免疫28

2.3　扩散培养中的初次免疫36

2.4　对异种红细胞的二次免疫42

2.5　对硝基苯半抗原的二次免疫44

2.6　对偶氮苯基半抗原的二次免疫52

2.7　在小量悬浮培养（100微升）中的免疫58

2.8　在小量扩散培养（100微升）中的免疫60

2.9　在微量悬浮培养（10微升）中的免疫63

3.1 引言67

第三章　溶血空斑试验67

3.2　玻片法（凝胶）70

3.3　平皿法（凝胶）76

3.4　染色和固定81

3.5　液体基质（玻片法）85

3.6　液体基质（微孔法）88

3.7　用IgM空斑消除法测定IgG的反应90

3.8　抗半抗原空斑法94

3.9　用空斑试验测定亲和力99

3.10　抗蛋白质空斑法101

3.11　多克隆反应的测定109

3.12　复制接种113

3.13　针对有核细胞表面抗原的IgM空斑形成细胞的测定114

第四章　细胞介导的细胞溶解反应124

4.1 引言124

4.2　细胞溶解性T淋巴细胞的体外产生127

4.3　铬释放试验法129

第五章　有限稀释分析法140

5.1　绪言140

5.2　B细胞前体的频率144

5.3　反应性B细胞前体的平均克隆大小146

5.4　协助性T细胞的频率147

5.5　细胞溶解性T细胞前体的频率148

6.1　绪言155

第六章　细胞增殖155

6.2　致有丝分裂因子诱导的反应158

6.3　混合淋巴细胞反应164

6.4　抗原诱导的T细胞增殖反应166

6.5　脾细胞培养的放射自显影术169

第二部分　细胞分离177

第七章　粘附178

7.1 引言178

7.2　葡聚糖凝胶G-10方法178

7.3　羰基铁粉方法182

7.4　尼龙毛方法185

8.1 引言189

第八章　大小和密度189

8.2　线性等密度牛血清白蛋白（BSA）梯度191

8.3　非连续性牛血清白蛋白（BSA）梯度196

8.4　硅胶梯度196

8.5　在单位重力下的速度沉降203

8.6　在低速离心下的速度沉降204

8.7　玫瑰花细胞的一步梯度分离208

第九章　细胞表面标志211

9.1 引言211

9.2　特异性抗血清和补体213

9.3　半抗原夹心玫瑰花形成法214

9.4　用凝集法去除玫瑰花219

9.5　Fc受体和补体受体221

9.6　花生和大豆凝集素227

9.7　用抗-免疫球蛋白抗体包被的塑料表面（盘化法）分离T和B细胞231

第十章　用灭活增殖细胞法进行功能性分离238

10.1　放射性胸腺嘧啶核苷脉冲标记238

10.2　5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷（BUdR）脉冲标记242

10.3　丝裂霉素C244

10.4　放射245

第三部分　制备供细胞研究用的免疫球蛋白249

第十一章　抗血清的制备和测试249

11.1　抗小鼠脑的异种抗血清249

11.2　针对淋巴细胞抗原的小鼠同种异型抗血清260

11.3　抗半抗原抗血清263

11.4　用于产生间接溶血空斑的兔抗小鼠免疫球蛋白抗血清264

11.5　用于半抗原玫瑰花形成，荧光标记和放射免疫沉淀法研究的兔抗小鼠免疫球蛋白的特异性抗血清267

11.6　抗小鼠免疫球蛋白抗血清的放射免疫沉淀法和荧光标记特异性测试法272

11.7　微量细胞毒试验276

11.8　半微量沉淀试验278

11.9　抗血清的储存279

第十二章　免疫球蛋白及其分段的纯化280

12.1 引言280

12.2　用硫酸铵沉淀免疫球蛋白280

12.3　二乙基氨基乙烷（DEAE）层析法282

12.4　用亲和层析法纯化抗半抗原抗体283

12.5　制备活性抗体分段286

第十三章　标记细胞表面抗原的抗体的修饰和使用289

13.1 引言289

13.2　半抗原夹心标记法289

13.3　荧光抗体295

13.4　荧光标记与观察300

13.5　结合于其他大分子的抗体306

第四部分　其他方法309

第十四章　细胞蛋白定量分析的双抗体放射免疫测定法310

14.1 引言310

14.2　使用125碘化钠及碘化物质工作时的安全措施310

14.3　蛋白质的放射性碘标记312

14.4 测定320

第十五章　几种手术方法329

15.1 引言329

15.2　胸腺切除329

15.3　皮肤移植336

15.4　脾切除术339

15.5　去势341

15.6　诱导嗅觉丧失343

第十六章　制备半抗原修饰的蛋白质抗原345

16.1 引言345

16.2　用偶氮苯半抗原修饰钥孔？血蓝素345

16.3　用三硝基苯半抗原修饰钥孔？血蓝素347

16.4　用二硝基苯半抗原修饰牛γ球蛋白349

第十七章　产生免疫球蛋白的杂交细胞系353

17.1　引言353

17.2　融合对象的制备354

17.3　NS-1与免疫脾细胞融合358

17.4　杂交细胞的选择（用HAT选择）361

17.5　对产生有关抗体的培养进行初筛364

17.6　转入1毫升培养（转板）及冻存杂交细胞365

17.7　用有限稀释法进行克隆化367

17.8　抗体生产368

17.9　抗体纯化：蛋白A-琼脂糖柱层析369

17.10　抗体的鉴定371

17.11　细胞分发中心372

第十八章　固相放射免疫测定法374

18.1　引言374

18.2　用于放射免疫测定的放射标记试剂的制备378

18.3 一步固相放射免疫测定法：测试125I标记的抗同种异型试剂的特异性381

18.4　两步固相放射免疫测定法：在抗体反应中同型和同种型表现的评定，例如，对在载体蛋白上的二硝基苯半抗原（DNP）的反应383

18.5　放射免疫封闭试验：免疫球蛋白水平的测定390

18.6 细胞结合试验：淋巴细胞的细胞表面抗原393

18.7 自动加样器396

第十九章　用单向和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析放射标记的淋巴细胞蛋白399

19.1　引言399

19.2 细胞蛋白的放射标记和提取401

19.3 细胞蛋白的免疫沉淀法409

19.4 样品的制备413

19.5　双向聚丙烯酰胺凝胶电泳418

19.6　单向SDS平板凝胶电泳法435

19.7　放射自显影术438

附录443

A　各种试剂的制备和检验443

A.1　胎牛血清（FCS）443

A.2　补体：豚鼠和兔血清445

A.3　平衡盐溶液（BSS）447

A.4　Hepes-缓冲平衡盐溶液449

A.5 营养液（nutritiveCoektail）450

A.6　2-巯基乙醇（2-ME）451

A.7　非缓冲平衡盐溶液452

A.8　磷酸盐缓冲盐溶液（PBS），pH7.2—7.4,10倍原液453

A.9　硼酸盐缓冲液（BBS）0.17M硼酸，0.12MNaCl,pH8.0453

A.10　1.0M磷酸盐缓冲盐溶液，pH7.6453

A.11　葡萄糖磷酸盐缓冲盐溶液（G-PBS），pH7.6453

A.12　0.15M磷酸盐缓冲盐溶液，pH7.2—7.4454

A.13　0.28M二甲胂酸盐（Cacodylate）缓冲液，pH6.9454

A.14　阿氏液454

A.15　改进的Click氏培养液454

A.16　火棉胶片-龙胆紫溶液455

B　实验室玻璃器皿的洗刷和消毒456

A.17　酸化水456

B.1　供组织培养工作使用的玻璃器皿的洗刷457

B.2　实验室玻璃器皿的灭菌457

C　液体试剂的灭菌458

C.1　高压灭菌法458

C.2　膜滤除菌法459

D　透析袋的制备460

E　同种异型-条件培养液的制备461

F　福氏佐剂462

G　制造商和销售者464

缩写476