《实用免疫学方法》求取 ⇩

1.2.2可溶性抗原1

1.2.2d兔丙种球蛋白（RγG）及人血清白蛋白（HSA）1

1.2.2c小鼠丙种球蛋白1

1.2.2b钥孔？血兰蛋白素（KLH）1

1.2.2a鸡丙种球蛋白（FγG）制备1

目录1

1.2.1红细胞1

1.2抗原1

1.1实用免疫学简介1

1、实验材料的制备1

1.2.3蛋白质的快速“透析”（脱盐）2

1.3半抗原—载体结合物3

1.3.1二硝基苯酚（DNP）—FγG或KLH3

1.3.2对氨基苯人血清白蛋白4

1.4抗血清5

1.4.1Freund完全佐剂5

1.4.2兔抗小鼠γ球蛋白5

1.4.3介面环状试验5

1.4.4明矾沉淀抗原5

1.6荧光色素标记抗血清的制备6

1.5已接触半抗原—载体的小鼠6

1.6.1标记技术6

1.4.7山羊或绵羊抗兔γ球蛋白6

1.4.6兔抗人全血清及血清白蛋白6

1.4.5兔抗鸡丙种球蛋白6

1.6.2荧光色素：蛋白质的比值的计算7

1.6.3荧光色素标记抗血清的分段7

1.6.4间接和直接免疫荧光7

1.6.5荧光素标记抗血清的标化8

1.6.6免疫荧光染色的特异性10

1.7细胞基本技术10

1.1.1由血液制备淋巴细胞10

1.7.2血液脱纤维10

1.7.3由固体淋巴器官制备淋巴细胞10

1.7.4吞噬细胞的去除10

1.7.5腹腔渗出液巨噬细胞11

1.8动物12

1.8.1家兔12

1.8.2小鼠12

1.8.3小鼠的X线辐射12

2、淋巴细胞的作用与功能13

2.1淋巴细胞13

2.2小鼠的淋巴细胞13

2.3不同来源淋巴细胞的分离14

2.3.1从血液分离淋巴细胞14

2.3.2从淋巴器官制取淋巴细胞16

2.3.3胸腺与血液白细胞的形态16

2.3.3a血片16

2.4活细胞计数17

2.3.4Way—Grunwald/Giemsa染色法17

2.3.3b细胞悬液片17

2.4.1染料排斥试验18

2.4.2用血球计数计数细胞19

2.5淋巴细胞的表面膜19

2.5.1淋巴细胞膜免疫荧光染色19

2.6结合抗原的淋巴细胞22

2.6.1绵羊红血球玫瑰花22

2.7T与B淋巴细胞受体23

2.7.1受体的范围23

2.7.1a抗原受体23

2.7.1bFc与补体受体（结合部位）23

2.7.2关于T与B淋巴细胞上是否存在免疫球蛋白的问题23

2.7.3淋巴细胞上Fc受体的检查24

2.8淋巴细胞表面膜的动力25

2.8.1淋巴细胞受体的帽状现象25

2.8.2利用“戴帽”淋巴细胞的实验26

2.8.3表面受体的重新合成30

2.9细胞各成份的不同动态30

2.10摘要和结论30

3、淋巴细胞及其效应细胞30

3.1B—效应细胞30

3.1.1桨细胞与抗体产生（抗FγG）30

3.1.1a冰冻切片30

3.1.1e抗原结合31

3.1.1d染色技术31

3.1.1c切片或涂片染色以观察产生抗体的细胞31

3.1.1b游离的细胞31

3.1.2体外计数分泌抗体的细胞32

3.1.3体内抗体效应35

3.2T—效应细胞36

3.2.1肉垂试验36

3.2.2对移植物的排斥作用37

3.2.2a对植皮的排斥37

3.2.2b免疫学性质37

3.2.3移植物对宿主的排斥反应38

3.3摘要和结论40

4.1.1网状内皮系统的颗粒清除41

4.1.2数据处理41

4.1自然免疫性41

4、体内的细胞动力学41

4.1.2a算术平均数42

4.1.2b标准差43

4.1.2c附注43

4.1.3被吞噬物质的结局44

4.1.4RE系统封闭44

4.2T—B的协同作用45

4.3耐受性46

4.3.1耐受性及选择性无应答性46

4.5超敏状态47

4.4自身免疫性47

4.5.1过敏反应性超敏48

4.5.1a体内过敏反应48

4.5.1b体外过敏反应48

4.5.2细胞毒性超敏49

？免疫复合物性超敏49

？摘要和结论49

5、抗体与抗原的相互作用50

5.1抗体特导性50

5.2一级结合反应50

5.2.2a抗原的放射性同位素标记51

5.2.2改良硫酸铵沉淀技术51

5.2.1硫酸铵沉淀反应51

5.2.2b测定52

5.2.3抗体亲合力的测定53

5.2.4平衡透析56

5.3二级相互作用—沉淀反应57

5.3.1定量沉淀素试验57

5.3.2抗体特异性的证实59

5.3.3琼脂沉淀反应60

5.3.3a单向散射免疫扩散61

5.3.3b双向扩散试验63

5.3.3d分子量及扩散系数的测定65

5.3.4免疫电泳分析65

5.3.3c相对抗原浓度65

5.3.4a琼脂凝胶电泳66

5.3.4b免疫电泳69

5.3.4c交叉电泳（对流电泳）69

5.3.4d含抗体基质中的电泳（火箭电泳）69

5.4二级相互作用—凝集反应71

5.4.1血球凝集试验72

5.4.1a一级或二级抗体应答73

5.4.1b重复接种抗原后抗体滴度的改变73

5.4.2抗原致敏红血球的凝集试验74

5.4.2a鞣酸处理的绵羊红血球74

5.4.2b检定方法74

5.4.5血型鉴定75

5.4.3用于类风湿因子测定的乳胶凝集试验75

5.4.4妊娠试验75

5.4.6Rh不相容性76

5.5摘要和结论76

6、抗体效应系统77

6.1补体77

6.1.1溶血性补体的总量77

6.1.2红细胞的标化77

6.1.3补体CH50的测定78

6.2补体结合的正路与旁路78

6.2.5双相免疫扩散79

6.2.4C3活化的分析79

6.2.3测定C3的单向免疫扩散79

6.2.2抗C3血清79

6.2.1C3的测定79

6.3用补体结合试验检查抗体或抗原80

6.3.1定量补体结合试验80

6.3.2补体结合试验的应用83

6.3.2a检查梅毒的Wassermann反应83

6.3.2b甲状腺微粒体的自身抗体83

6.3.2c病毒抗体的检查83

6.4利用抗C3免疫荧光抗体检查抗原抗体复合物83

6.5吞噬细胞的调理素粘附作用和免疫粘附作用83

6.5.1人和小鼠的嗜细胞性抗体84

6.6摘要和结论86

7免疫球蛋白的分离和结构87

7.1盐析87

7.1.1关于免疫球蛋白的粗提纯87

7.1.2轻链的快速浓缩87

7.1.3蛋白质浓度对于盐析作用的影响88

7.2粒析（sizefractionation）88

7.2.1分子筛原理88

7.2.2凝胶的基本要求和类型89

7.2.3溶质的分配系数（KD）89

7.2.4凝胶层析的应用90

7.2.6在SephadexG-200上进行血清蛋白的分组91

7.2.5柱层析装置91

7.2.7超速离心93

7.3离子交换层析93

7.3.1用DEAE—纤维素进行兔IgG的分批（batch）制备93

7.3.2IgG制品的检定94

7.3.3在DEAE—纤维素柱上通过离子强度梯度洗脱法制备IgG94

7.3.4从脐带血中提制IgG97

7.3.5从初乳中提制IgA97

7.3.6从血清中提制IgM97

7.4制备电泳98

7.4.1Pevikon板块电泳98

7.3.8QAE—Sephadex柱层析98

7.3.7从血清中提制IgE98

7.4.2蛋白质区带的洗脱99

7.4.3蛋白质含量测定99

7.5等电聚焦99

7.5.1pH梯度100

7.5.2分析等电聚焦100

7.5.3制备等电聚焦103

7.6免疫球蛋白分子的结构103

7.6.1IgG还原至重链和轻链103

7.6.2轻链及重链决定簇（基）的检测105

7.7用蛋白酶裂解IgG105

7.7.1木瓜酶消化105

7.7.2胃酶消化107

7.8.1免疫球蛋白的分离108

7.8摘要和结论108

7.8.2IgG的结构109

7.8.3IgM的结构109

7.8.4IgA的结构110

8、纯化抗体和纯化细胞111

8.1纯化抗体111

8.1.1免疫吸附剂的制备111

8.1.2用免疫吸附剂纯化抗体112

8.1.3免疫吸附剂回收洗脱物的计算114

8.2.1排空B细胞以制备T细胞115

8.2纯化细胞115

8.1.5免疫吸附剂的实际应用115

8.1.4关于纯化抗体的试验115

8.2.2抗原特异性细胞的排空和增集116

8.2.3抗原免疫吸附剂的制备117

8.2.4排空及增集细胞群中抗原反应性117

9、异常免疫球蛋白的检测技术119

9.1血清蛋白电泳119

9.2密度计分析121

9.3免疫电泳122

9.4免疫球蛋白的定量125

9.5在SephadexG—200上进行凝胶层析128

9.5.1凝胶柱制备128

9.6血清粘度测定129

9.5.3薄层凝胶层析129

9.5.2分离手续129

9.7尿Bence—Jones蛋白的分析130

9.7.1尿的浓缩131

9.7.2区带电泳131

9.7.3免疫电泳131

9.8冷球蛋白（cryoglobulin）的检测131

10、其它免疫化学方法133

10.1定量免疫吸附133

10.1.1原理134

10.1.2抗球蛋白的分析134

10.2亲和力测定135

10.3.1测定的原理136

10.3放射免疫测定136

10.3.2操作方法137

10.4酶联吸附免疫测定137

10.4.1基本原理138

10.4.2酶标记方法139

10.4.3试验方法141

10.4.4ELISA的应用143

11、细胞免疫学的高级技术144

11.1T—B对半抗原—载体结合物的协同作用144

11.1.1DNP空斑形成细胞的检定144

11.1.2红细胞的三硝基苯基化145

11.1.3DNPFab′抗绵羊红细胞（SRBC）的致敏145

11.1.3a指示细胞的致敏146

11.1.3b检测小室的制备147

11.1.4抗—DNP检定147

11.2半抗原—载体对异种载体的协同作用148

11.3淋巴细胞循环149

11.3.1个体发生的游走型式149

11.3.2淋巴细胞的“定居”149

11.3.3细胞的器官内分布151

11.4免疫系统的处理151

11.4.1用X射线抑制免疫应答151

11.4.2放射抵抗性152

11.5.1外科去腔上囊术153

11.5淋巴系统的外科和化学处理法153

11.5.2外科胸腺切除术154

11.5.2a新生小鼠的胸腺切除154

11.5.2b新生小鸡的胸腺切除154

11.5.2c成年的腔上囊切除术及胸腺切除术155

11.6免疫重建小鼠155

11.7小鼠胸导管造管术155

11.8细胞特异性抗原及抗血清157

11.8.1抗淋巴血清157

11.8.2ALS体内的作用方式157

11.8.3体内免疫粘连158

11.8.4抗T或抗B异种抗血清158

11.8.6抗小鼠脑159

11.8.5对淋巴细胞膜同种异体抗原的抗血清159

11.8.7同种异体血清间接免疫荧光160

11.9补体介导的细胞溶解161

11.9.1染料排除试验161

11.9.251Cr标记的细胞溶解163

11.10淋巴细胞的标记放射自显影术164

11.11离体T淋巴细胞166

11.11.1致有丝分裂应答166

11.11.2全血技术168

11.11.3淋巴母细胞转化的形态学测定168

11.11.5培养技术169

11.11.6细胞介导的细胞毒性169

11.11.4混合淋巴细胞反应169

11.11.7混合淋巴细胞反应（MLR）与细胞介导的细胞溶解（CMC）170

11.11.8用PHA母细胞进行CMC171

11.12淋巴细胞产生的可溶性因子172

11.12.1巨噬细胞游走抑制试验172

11.13抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCMC）173

12、免疫学动物实验操作方法175

12.1注射175

12.1.1注射前的准备175

12.1.2皮内注射175

12.1.2.1小白鼠175

12.1.2.2豚鼠与大动物175

12.1.4.1家禽176

12.1.4肌肉注射176

12.1.3.1小白鼠176

12.1.3皮下注射176

12.1.3.2其它动物176

12.1.4.2其它动物177

12.1.5小白鼠腹腔注射177

12.1.6静脉注射177

12.1.6.1小白鼠177

12.1.6.2大白鼠178

12.1.6.3豚鼠178

12.1.6.4家兔178

12.1.7.1小白鼠179

12.1.8豚鼠角膜注射179

12.1.7.2豚鼠179

12.1.7脚掌注射179

12.1.6.6家禽179

12.1.6.5其它动物179

12.1.9家禽肉垂注射180

12.2移植180

12.2.1小白鼠尾皮移植180

12.2.2家禽肉垂移植181

12.2.3小白鼠肾脂囊下移植181

12.3血液采集183

12.3.1小白鼠（由眼后静脉丛取血）183

12.3.4家兔184

12.3.3豚鼠184

12.3.2.2心脏采血184

12.3.2.1眼后静脉丛取血184

12.3.2大白鼠184

12.3.5家禽186

12.3.5.1翅静脉采血186

12.3.5.2小量或连续取血186

12.3.6其它动物186

12.4胸腺切除186

12.4.1啮齿类186

12.4.1.1成鼠的胸腺除去186

12.4.1.2乳鼠的胸腺除去188

12.4.2日龄雏鸡的胸腺除去188

12.5.1卵内腔上囊摘除190

12.5腔上囊摘除190

12.5.2日龄雏鸡腔上囊摘除192

12.6麻醉注意事项193

12.6.1乙醚193

12.6.2氯仿193

12.6.3三氯乙烯193

12.6.4氟烷194

12.6.5二氧化碳与氧气194

12.6.6二氧化碳194

12.6.7戊巴比妥钠194

12.6.8安眠酮194

12.6.9一般注意事项194

13.1概率195

13、免疫学统计常用方法195

13.2平均数196

13.2.1算术平均数196

13.2.2中位数199

13.2.3几何平均数201

13.3离势量数或称变异量数203

13.3.1全距203

13.3.2均差204

13.3.3方差204

13.3.4标准差204

13.3.5标准差的应用206

13.3.6标准误206

13.3.7置信限207

13.3.8标准差和标准误的计算方法208

13.3.8.1用样本均数估计总体均数208

13.3.8.2用样本百分率估计总体百分率213

13.4t测验217

13.4.1两个平均数差别的显著性测验217

13.4.1.1样本平均数和总体平均数的比较217

13.4.1.2两个样本均数的比较222

13.4.2两个百分比（率）差别的显著性测定226

13.4.2.1样本百分比（率）和总体百分比（率）的比较226

13.4.2.2两个样本百分比（率）的比较228

13.5F测验230

13.5.1方差分析法概要231

13.5.2完全随机设计资料的方差分析计算法（单因素方差分析）234

13.5.2.1各组实验对象的变量个数相等时的方差分析法234

13.5.2.2各组实验对象的变量个数不相等时的方差分析法236

13.5.3随机区组设计资料的方差计算法（两因素方差分析）237

13.5.4各组均数之间的相互比较240

13.5.4.1各组实验对象的变量个数相等的比较241

13.5.4.2各组实验对象的变量个数不相等的比较242

13.6相关与回归245

13.6.1直线相关246

13.6.2直线回归247

13.6.3相关系数及相关系数的显著性测验248

13.6.4回归方程的计算方法250

13.6.5回归系数的显著性测验251

13.7x2测验256

13.7.1有两种反应的单组实验——1×2表法256

13.7.2有两种以上反应的单组实验——1×n表法257

13.7.3两组实验和两种反应——2×2表法257

13.7.4两组以上实验和两种以上的反应——n1×n2表法262

附录271

Ⅰ、缓冲液和培养基271

Ⅱ、常用的免疫化学数据表275

Ⅲ、相对离心力计算图277

Ⅳ、硫酸铵饱和度计算图278

Ⅴ、生物制品（抗原和抗体）的国际标准和参考制品278