《基因诊断技术 非放射性操作手册》

第一章 概论1

第一节 非放射性基因诊断技术的概述1

第二节 DNA探针的非放射性标记10

第三节 寡核苷酸的人工合成23

第二章 染色体DNA的制备36

第一节 染色体DNA分离的原理36

第二节 外周血(骨髓)的DNA提取36

第三节 培养细胞的DNA提取39

第四节 组织DNA的提取40

第五节 由微量及特殊标本中制备染色体DNA41

第六节 DNA的浓度测定43

第三章 细胞总RNA的制备46

第一节 非超离心一步法46

第二节 氯化锂沉淀法48

第三节 超离心法49

第四节 由血清中提取病毒RNA51

第五节 总RNA制品的质量控制52

第四章 重组质粒DNA的制备与DNA片段的回收54

第一节 质粒DNA的转化54

第二节 质粒DNA的提取61

第三节 DNA片段的回收68

第五章 DNA的非放射性标记73

第一节 光促DNA的生物素标记73

第二节 酶促DNA的生物素标记74

第三节 生物素DNA探针的分离纯化76

第四节 生物素探针的显色灵敏度的检测77

第六节 DNA非放射性标记法79

第五节 地高辛标记DNA79

第六章 寡核苷酸的非放射性标记94

第一节 酶促生物素标记寡核苷酸94

第二节 酶促地高辛标记寡核苷酸94

第三节 化学法生物素标记寡核苷酸95

第四节 酶标寡核苷酸97

第五节 生物素(地高辛)寡核苷酸的显色灵敏度测定99

第六节 非放射性标记寡核苷酸探针101

第七章 非放射性探针的斑点杂交109

第一节 生物素DNA探针杂交灵敏度测定109

第二节 HRP标记DNA探针的RNA斑点杂交111

第三节 生物素(地高辛)寡核苷酸探针的斑点杂交114

第四节 HRP标记寡核苷酸探针的斑点杂交115

第五节 PCR产物的反相杂交117

第八章 非放射性标记探针的Soulhern印迹杂交119

第一节 DNA的限制性内切酶酶解119

第二节 DNA酶解片段的电泳分离120

第三节 Southern转移120

第四节 生物素探针杂交121

第五节 地高辛标记探针的杂交121

第六节 HRP标记探针作DNA指纹图121

第九章 地高辛标记DNA探针的Northern印迹杂交128

第十章 细胞原位杂交131

第一节 概述131

第二节 细胞原位杂交技术：生物素--抗生物素蛋白-AP显色法131

第三节 细胞核原位杂交技术：生物素--间接免疫荧光法134

第二节 染色体原位杂交技术：生物素-抗生物素蛋白-AP显色法139

第一节 概述139

第十一章 染色体原位杂交139

第三节 染色体原位杂交技术：生物素--间接免疫荧光法143

第四节 有关染色体原位杂交的一些技术问题146

第五节 染色体原位杂交的应用147

第十二章 非放射性核酸标记物的显示149

第一节 生物素-抗生物素蛋白-HRP显色体系149

第二节 生物素-链抗生物素蛋白-AP显色体系151

第三节 地高辛-抗体-AP显色体系153

第四节 碱性磷酸酶化学发光检测体系154

第十三章 聚合酶链反应156

第一节 基本原理156

第二节 耐热DNA聚合酶157

第三节 DNA扩增仪157

第五节 PCR试剂的制备158

第四节 DNA样本158

第六节 引物和探针的选定和纯化159

第七节 PCR的操作160

第八节 注意事项161

第十节 PCR技术的应用161

第九节 PT/PCR162

附录166

一、常用试剂的配制166

(一)饱和酚166

(二)氯仿--异戊醇166

(三)供配制各种溶液用的贮存母液166

(四)限制酶水解缓冲液169

(五)常用电泳缓冲液169

(七)抗菌素液170

(六)常用凝胶载样缓冲液170

(八)液体培养基171

二、有关实验技术173

(一)玻璃及塑料器皿的硅化173

(二)菌种的保存173

三、常用单位的换算174

(一)重量换算174

(二)A260单位的换算174

(三)摩尔的换算174

(四)蛋白质的换算174

四、DNA片段标准物175

(一)pBR322酶切片段175

(六)核酸碱基对与分子量的换算175

(五)常见核酸的分子量175

(二)Lambda噬菌体DNA酶切片段176

(三)ФX174酶切片段176

五、常用名词缩写和简称176

(一)抗生素176

(二)测量单位177

(三)分子生物学一些名词与试剂177

(四)氨基酸178

六、生化技术补充资料178

(一)遗传密码表178

(二)磷酸盐缓冲液179

(三)酸碱浓度179

(四)离心速度与离心力的换算180

(五)限制性内切酶181