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第一章　实验室基本设备及常用试剂1

一、基本设备1

（一）显微镜1

（二）切片机4

（三）冷冻切片箱（Cryostat）6

（四）磨刀机6

（五）自动脱水机6

（六）恒温箱与干燥箱6

（七）冰箱7

（八）离心机8

（九）天平8

（十）酸度计8

（十一）定时钟8

（十二）一般手术器械及维修工具8

（十三）木器设备8

（十四）染色缸与染色架9

（十五）载玻片与盖玻片10

（十六）常用玻璃器皿10

（十七）浸蜡及包埋用具11

（十八）其它切片用具11

二、常用试剂12

1．蛋白甘油12

2．盐酸-酒精12

3．石炭酸-二甲苯12

4．碳酸锂饱和水溶液12

5．碘酒12

6．Lugol碘液12

7．苯胺水12

8．生理盐水13

9．Ringer液13

10．Locke液13

11．升汞饱和水溶液13

12．清洁液（洗液）13

13．酒精稀释液14

第二章　取材及固定15

一、动物致死法15

二、取材注意事项16

三、组织固定法17

（一）固定的方法17

（二）固定的目的18

（三）注意事项及影响固定的因素18

（四）固定剂浸入组织深度参考表19

（五）固定液19

1．单纯固定液20

（1）酒精20

（2）甲醛20

（3）升汞22

（4）醋酸22

（5）苦味酸23

（6）重铬酸钾24

（7）锇酸24

（8）铬酸26

（9）丙酮26

（10）三氯醋酸26

2．混合固定液26

（1）酒精-甲醛液（AF液）26

（2）Carnoy液27

（3）Bouin液27

（4）苦味酸-硫酸液28

（5）Rossman液28

（6）"Susa"Heidenhain液28

（7）Romcis液29

（8）甲醛-醋酸钠（钙）-升汞液29

（9）Stievc液29

（10）Orth液29

（11）Zenker液30

（12）Helly液30

（13）Champy液31

（14）Flemming液31

（15）Kolmer液31

（16）Marchi液31

（17）Verhoeff液32

第三章　固定后处理及切片33

一、洗涤与修切33

二、脱水与透明34

三、各种包埋法41

（一）石蜡包埋法41

（二）火棉胶包埋法45

（三）碳蜡包埋法50

（四）明胶包埋法51

四、切片、粘片及封固51

（一）切片刀与磨刀52

（二）石蜡切片法56

（三）火棉胶切片法59

（四）冰冻切片法60

（五）封固与封固剂63

组织切片制作过程简表65

第四章　染料、常用染液及常规苏木精-伊红染色法66

一、染料66

（一）染料的性质简介66

（二）染料的分类71

（三）使用染料时应注意事项71

（四）染色原理简介72

二、常用染液及染色法74

（一）细胞核常用染色法74

1．苏木精74

（1）Hansen铬矾苏木精75

（2）Mayer酸性苏木精-明矾染色法75

（3）Mayer钾矾-苏木红染色法76

（4）Delafield苏木精染色法76

（5）Ehrlich酸性苏木精染色法76

（6）Harris苏木精染色法76

（7）Weigert铁苏木精染色法77

（8）Mallory磷钨酸苏木精染色法77

2．卡红（胭脂红、洋红）77

（1）Grenacher钾矾-卡红染色法78

（2）Grenacher硼砂-卡红染色法78

（3）Orth锂卡红染色法78

（4）Mayer副卡红染色法78

3．碱性煤焦油染料染色法79

（1）L？ffer碱性美蓝染色法79

（2）Mayer硫堇或甲苯胺蓝染色法79

（3）Metzner铁矾硫堇染色法79

（4）Winiwarter沙黄染色法79

（5）Flemming沙黄染色法79

（6）Babes苯胺沙黄染色法80

（7）Weigert裨斯麦棕染色法80

（8）Pappenhein甲基绿染色法80

（9）碱性品红80

4．媒染染料细胞核染色法80

（1）核坚牢红81

（2）Einarson没食子酸青-铬矾染色法81

（3）Berube没食子酸青-铬矾染色法81

（4）Proescher-Arkush天青石蓝B染色法81

（5）Einarson蒽蓝染色法82

（6）酸性茜素蓝染色法82

（二）细胞质常用染料82

1．伊红82

2．藻红83

3．焰红83

4．酸性品红83

5．光绿及坚牢绿83

6．其它83

（三）脂肪染料83

三、苏木精-伊红染色法及多色染色法84

（一）常规苏木精-伊红染色法84

（二）Damank苏木精-苦味酸-噻嗪红染色法86

（三）Gray天青石蓝-丽春红2R染色法87

（四）Cajal品红-苦味酸靛卡红染色法87

（五）Gabe-MsMartoje三色染色法88

（六）苏木精-伊红整块染色法88

第五章　细胞器91

一、线粒体91

（一）材料与固定91

（二）切片与染色91

1．Heidenhain铁苏木精染色法91

2．Regaud铁苏木精染色法92

3．Altmann-Meves酸性品红染色法92

4．Altmann-Kull酸性品红-甲苯胺蓝染色法93

5．Seki硫酸钠茜素-品红染色法94

6．Cowdry漂白法94

二、高尔基复合体95

1．Cajal硝酸铀法95

2．Da-Fano改良Cajal法95

3．Baker苏丹黑B染色法96

三、中心体与染色体（细胞分裂）97

（一）材料的选择97

（二）固定与切片97

（三）染色法97

1．Hickson巴西木素染色法97

2．Ehrlich-Biondi染色法98

3．Paulette-Vanerll白细胞及淋巴细胞中心体染色法99

4．Hall品红-苦味酸-靛卡红染色法99

第六章　纤维性结缔组织100

一、胶原纤维100

1．Van Gieson染色法100

2．Mallory三色染色法101

3．武兆发改良Mallory三色法101

4．Masson三色染色法（改良法）102

5．Heidenhain“AZAN”染色法103

二、弹性纤维105

1．醛品红染色法105

2．地衣红染色法106

3．Verhoeff碘-铁苏木精染色法106

4．碱性蓝B染色法107

5．Weigert弹性纤维染色法108

三、网状纤维109

1．Foot染色法110

2．Gordon-Sweet染色法111

3．Humason-Lushbaugh染色法112

4．Gomori染色法113

5．Wilder染色法114

6．综合简便法115

7．网状纤维镀银块染法116

四、组织细胞及成纤维细胞117

1．台盼蓝注射HE染色法117

2．铁矾苏木精染色法118

五、成纤维细胞的培养与制备119

六、肥大细胞（肥大细胞染色简表）121

七、浆细胞122

1．天青Ⅱ-伊红染色法122

2．Unna多色性甲基蓝染色法123

第七章　软骨及骨125

一、软骨125

二、骨125

1．骨磨片125

2．镀银法显示骨陷窝及骨小管126

3．染料染色法显示骨小管127

（1）酸性品红染色法127

（2）结晶紫或大力紫染色法127

4．骨的脱钙及切片128

三、骨发生132

1．茜素红-多色性美蓝染色法132

2．Von Kossa改良法133

第八章　血液及骨髓134

一、血液和骨髓涂片技术134

二、涂片的染色135

（一）Wright染色法135

（二）Giemsa染色法136

（三）Wright-Giemsa混合染色法136

（四）May-Grünwald染色法137

三、网织红细胞煌焦油蓝染色法138

四、血细胞超活体染色法139

（一）中性红-耶那绿干染色法139

（二）中性红-耶那绿湿染色法140

五、骨髓切片141

苏木精-美蓝-天青Ⅱ-伊红染色法141

六、血细胞常用组织化学染色法143

（一）核酸143

（二）多糖143

（三）蛋白质144

（四）酶144

1．单胺氧化酶显示法144

2．过氧化酶显示法145

第九章　肌肉组织147

（一）Mallory磷钨酸苏木红或苏木精染色法147

（二）Heidenhain铁矾苏木精染色法149

（三）碘酸钠-苏木精块染心肌闰盘法150

（四）平滑肌分离标本制作法151

第十章　神经组织153

一、神经组织的处理过程及应注意事项153

二、神经组织的一般染色156

三、神经细胞胞体的染色156

（一）Golgi镀银法156

（二）灌注的快速Golgi法159

（三）Cox法160

（四）Cox-钨酸盐改变法160

（五）Nissl法染“虎斑”（“尼氏体”）162

（六）长期固定于甲醛液的陈旧材料染色法163

四、脊髓前角细胞分离标本制作法164

五、神经原纤维及神经末梢165

（一）Ramon y.Cajal各法165

1．Cajal氨酒精法（Ⅲ）165

2．Cajal吡啶法（Ⅴ）166

3．Cajal水合氯醛法（Ⅵ）166

（二）Holmes法染神经原纤维167

（三）Cajal-Favorsky法染周围神经168

（四）Bielschowsky-Gros-Lawrentjew法169

（五）Ranson吡啶-银法显示无髓纤维171

（六）吡啶-银法显示毛囊神经末梢171

六、De Castro内耳双极神经细胞显示法172

七、肠肌丛镀银显示法173

八、胚胎性神经组织的改良银染法（Rager等）174

九、运动终板、肌梭、腱梭及环层小体的氯化金法（Ranvier改变法）175

十、显示突触法177

（一）Golgi-Дейнека法177

（二）Rassmussen法178

十一、髓鞘染色法179

（一）髓鞘漏斗膜（Schmidt-Lantermann裂隙）的Cajal显示法179

（二）Weigert染髓鞘法180

（三）Pal-Weigert染髓鞘法181

（四）Kultschizky改良法182

（五）Weil髓鞘染色石蜡切片法183

（六）劳克坚牢蓝-焦油紫同时染髓鞘及尼氏体法（Klüver-Barrera）183

十二、溃变纤维显示法185

（一）Swank-Davenport法186

（二）Nauta法（1957）187

（三）Fink-Heimer法（1967）189

（四）Ebbesson-Robinson双重银法（1970）190

十三、神经胶质191

（一）Del Rio-Hortega碳酸银法显示小胶质细胞（panfield改良法）192

（二）Grono法显示少突胶质细胞193

（三）Ramon y Cajal氯化金升汞法显示星状胶质细胞194

（四）Marchalls法显示小胶质和少突胶质细胞195

十四、整个人脑切片制作法196

（一）Mülligan大脑厚切片染色法197

（二）大脑厚切片油红O染色法198

（三）Einarson没食子酸青染灰质神经细胞法199

（四）Weil苏木精染髓鞘法200

十五、辣根过氧化酶HRP微量注射与离子透入法201

（一）辣根过氧化酶微量注射法201

（二）辣根过氧化酶离子透入法203

第十一章 血管，血管注射技术，心脏及淋巴器官205

一、毛细血管及大网膜铺片205

（一）Wright染色显示毛细血管205

（二）镀银法显示内皮205

二、各型动、静脉的染色206

苏木精-复制伊红染色法显示大动脉弹性膜207

三、血管注射技术208

（一）注射胶液的配制208

（二）注射过程209

四、心脏210

五、淋巴器官210

第十二章 消化系统及呼吸系统211

一、消化系统211

（一）取材与固定211

（二）消化管的上皮细胞212

1．表面上皮的PAS染色213

2．胃腺主细胞（酶原细胞）染色214

3．胃底腺壁细胞（盐酸细胞）染色214

4．小肠潘氏细胞（Paneth细胞）染色214

5．嗜银或亲银细胞214

（三）胰腺218

1．Mallory-Heidenhain-Azan染色法218

2．Gomori醛复红染色法220

3．Gomori铬明矾-苏木精-焰红法221

（四）肝脏222

1．贮脂细胞222

2．胆小管223

3．肝Kupffer细胞（星状细胞）显示法224

二、呼吸系统225

（一）取材、固定包埋及染色225

（二）纤毛运动新鲜标本观察法226

（三）肺泡上皮镀银法（Jcker）226

（四）肺泡Ⅱ型细胞染色法（McNary）227

（五）气管上皮分离标本制作法227

第十三章 泌尿及生殖系统229

一、泌尿系统229

（一）肾的常规染色229

1．球旁细胞结晶紫染色法（Harada）229

2．Bowie球旁细胞颗粒的猩红-乙基紫染色法230

（二）膀胱的一般染色230

二、生殖系统231

（一）两性生殖器官一般染色231

（二）睾丸间质细胞染色法（Threadgold）231

第十四章 内分泌腺232

（一）甲状腺滤泡旁细胞染色法232

（二）肾上腺嗜铬细胞染色法（Wiesel）233

（三）肾上腺嗜铬细胞染色法（Orth）233

（四）肾上腺脂滴233

（五）松果体细胞改良染色法（Achucarro-Hortega）234

（六）脑下垂体234

1．垂体神经部235

2．垂体腺部235

（1）Adams-Swettenham法235

（2）Paget-Eccleston法236

第十五章　皮肤、眼球及内耳238

一、皮肤238

（一）皮肤一般染色238

（二）黑色素细胞238

1．多巴黑色素反应石蜡切片法239

2．多巴黑色素反应冰冻切片法240

3．-SH基的铁氰化物显示法241

4．-SS基的过甲酸-Schiff显示法242

（三）细胞间桥243

二、眼球243

（一）Szent-Gyorgyri固定眼球切片法243

（二）复方甲醛固定眼球法244

三、内耳245

内耳一般染色245

第十六　章胚胎标本制作法246

一、两栖类胚胎标本的制作246

（一）卵的受精246

（二）卵裂、囊胚、原肠胚及神经胚246

（三）固定与固定液247

1．Gilson升汞-硝酸混合液247

2．Romeis升汞-三氯醋酸混合液247

3．Gilson-Petrunkewistch混合液247

4．Smith改良Tellyesniczky液247

5．Whitman脱胶膜法248

6．Schultze脱胶膜法248

（四）脱水及包埋248

（五）染色248

二、鸡胚标本的制作248

（一）孵育法248

（二）取胚法249

（三）固定250

1．McClung甲醛-硝酸混合液250

2．Kleinenherg苦味酸-硫酸混合液250

（四）染色250

（五）切片及完整标本制作251

三、猪胚标本的制作251

HE整体染色法及连续切片251

四、小白鼠胚胎标本的制作254

（一）小白鼠的选择254

（二）胎龄的确定255

（三）取材255

（四）标本制作255

鼠胚透明标本骨骼染色法（Dawson改变法）256

第十七章　脱落细胞涂片染色法258

一、癌细胞涂片染色法258

（一）取材注意事项258

1．女性生殖道脱落细胞的取材258

2．食管脱落细胞的取材258

3．痰液脱落细胞的取材258

4．胸、腹水中脱落细胞的取材259

5．胃液、尿液中脱落细胞的取材259

6．乳腺及前列腺分泌物的取材259

（二）固定259

（三）染色260

1．常规HE染色法260

2．巴氏（Papanicolaou）涂片染色法260

3．邵氏（Shorr）染色法264

4．改良的May-Grünwald-Giemsa染色法264

5．吖啶橙荧光染色法265

二、性染色质染色法266

（一）取材266

（二）固定266

（三）染色266

1．Moore焦油紫染色法267

2．Guard猩红-坚牢绿染色法267

三、羊水细胞染色268

第十八章　染色体技术270

一、染色体简介270

二、实验室设备270

（一）仪器270

（二）器材270

（三）培养基及其它试剂271

1．199培养液271

2．1640培养液271

3．0.5％水解乳白蛋白培养液271

4．0.85％生理盐水271

5．植物血凝素271

6．200单位／毫升肝素溶液272

7．0.5微克／毫升秋水仙素溶液272

8．3.5%NaHCO3溶液272

9．0.075 M氯化钾溶液272

10．磷酸缓冲液（pH6.8）272

三、普通染色体标本显示法272

（一）微量全血培养法272

（二）骨髓直接培养法274

（三）骨髓短期培养法274

（四）羊水细胞培养法274

四、染色体分带技术275

（一）G-带显示法275

（二）C-带显示法275

五、姊妹染色体单体差别染色法276

第十九章　常用的组织化学方法279

一、核酸279

（一）Feulgen反应显示DNA279

（二）甲基绿派洛宁反应显示DNA和RNA282

（三）甲基绿-派洛宁改良法282

（四）Brachet甲基绿-派洛宁改良法283

（五）Schiff块染显示DNA法284

二、碳水化合物285

（一）简介285

（二）多糖285

1．糖原组织化学技术简介285

2．高碘酸Schiff反应（PAS）显示糖原287

3．Best卡红显示糖原288

（三）粘蛋白与粘多糖289

1．染色特点简介289

2．标准阿利新蓝染色法291

3．不同电解质浓度的阿利新蓝染色法291

4．不同pH阿利新蓝染色法292

5．醛品红-阿利新蓝染色法292

6．PAS-阿利新蓝染色法293

7．天青A异染性染色法293

三、蛋白质与氨基酸294

（一）蛋白质的性能及鉴定294

（二）汞-溴酚蓝法显示蛋白质295

（三）显示碱性蛋白质的坚牢绿法296

（四）显示蛋白质结合性氨基的茚三酮-Schiff反应296

（五）二硝基氟苯（DNFB）法297

（六）显示酪氨酸的Millon反应299

（七）显示酪氨酸、色氨酸、组氨酸的四氮盐偶联反应299

（八）显示色氨酸的对二甲胺基苯甲醛-亚硝酸盐法300

（九）显示精氨酸的坂口8-羟基喹啉反应法301

（十）用酶的消化作用鉴定蛋白质303

1．胰蛋白酶、胃蛋白酶及糜蛋白酶303

2．胶原酶304

3．弹性蛋白酶304

4．附录：蛋白质活性基团的封闭法304

四、脂肪305

（一）脂肪染色简介305

（二）油红O染色法305

（三）苏丹Ⅲ＋Ⅳ混合染色法305

（四）苏丹黑B染色法Ⅰ306

（五）苏丹黑B染色法Ⅱ307

（六）硫酸耐尔蓝法307

（七）锇酸染色法308

五、酶类308

（一）酶类的性能308

（二）磷酸酶-硷性磷酸酶与酸性磷酸酶309

（三）Gomori-Takamatsu钙钴法显示硷性磷酸酶309

（四）重氮盐偶联法显示硷性磷酸酶311

（五）Gomori铅法显示酸性磷酸酶312

（六）重氮盐偶联法显示酸性磷酸酶312

（七）钠-钾三磷酸腺苷酶（简写ATPase）显示法313

（八）镁激活三磷酸腺苷酶的铅法314

（九）非特异性酯酶显示法314

（十）吐温显示脂酶法（Gomori）315

（十一）吐温显示脂酶法（Martin）316

（十二）硫代胆硷法显示胆硷酯酶（Koelle）317

（十三）Koelle法整块染色显示胆硷酯酶319

（十四）Karnovsky-Roots直接法显示胆硷酯酶320

（十五）琥珀酸脱氢酶Nitro BT显示法322

第二十章　放射自显影术323

一、放射自显影术简介323

二、实验室常用设备和试剂323

（一）暗室323

（二）标记物323

（三）感光材料324

（四）底层液325

（五）显影液（D-19b）326

（六）定影液（F-5）326

三、整体动物放射自显影法326

四、显微放射自显影法327

（一）切片法327

（二）涂片法328

五、体外培养细胞的放射自显影法329

六、应用放射自显影技术注意事项330

第二十一章　荧光显微镜技术331

一、荧光显微镜技术简介331

二、荧光染料（荧光色素）331

1．硷性荧光染料332

2．酸性荧光染料332

3．中性荧光染料332

三、荧光显微镜333

（一）光源334

（二）滤片系统334

1．激发滤片334

2．吸热滤片及吸热并吸收紫外线滤片335

3．阻断滤片336

4．中性滤片336

（三）显微镜336

四、荧光显微镜的使用方法336

五、荧光染色方法337

（一）末梢血液吖啶橙荧光染色法337

（二）肥大细胞吖啶橙荧光染色法338

（三）细胞内DNA和RNA吖啶橙荧光染色法339

（四）显示细胞内DNA和RNA吖啶橙荧光快速染色法340

（五）同时显示两种核酸和类脂质的荧光染色法340

（六）显示细胞核DNA的荧光Feulgen反应法341

（七）显示组织细胞内粘蛋白的荧光PAS反应法342

（八）显示淀粉样物质的荧光染色法343

（九）显示去甲肾上腺素的荧光法343

（十）Y小体的荧光染色法344

（十一）显示钙及铝的荧光染色法344

六、免疫荧光技术345

（一）免疫荧光抗体技术的基本原理345

1．直接法346

2．间接法347

3．补体法347

（二）免疫荧光抗体技术347

1．免疫动物348

2．制备抗血清349

3．提取免疫球蛋白349

4．制备荧光抗体350

5．荧光抗体的染色法353

七、荧光抗体方法在医学生物学中的应用354

第二十二章　超薄切片法357

一、取材357

（一）实验动物的取材357

（二）骨髓标本的取材358

（三）血液标本的取材358

（四）细胞悬浮液的取材358

二、固定359

（一）固定剂360

1．戊二醛360

2．多聚甲醛360

3．锇酸360

（二）固定液的配制361

1．戊二醛固定液361

2．多聚甲醛-戊二醛混合固定液362

3．锇酸固定液362

（三）灌注固定法363

（四）固定后的冲洗364

三、脱水365

四、包埋366

（一）环氧树脂812包埋法367

（二）环氧树脂618包埋法368

（三）包埋方法370

1．胶囊包埋法370

2．对有方向性标本的包埋法370

五、切片371

（一）修块371

（二）光学切片与染色372

（三）铜网及支持膜的制作373

（四）玻璃刀与刀槽的制作374

（五）切片的厚度377

（六）切片过程中出现的缺陷及消除方法377

六、电子染色法379

（一）整块染色法380

1．醋酸铀染色法380

2．磷钨酸染色法380

（二）切片染色法380

1．醋酸铀染色法380

2．铅染色液381

3．染色工具382

（三）防止标本污染应注意的事项387

第二十三章　显微镜摄影388

一、基本设备388

1．显微镜388

2．相机389

3．翻拍台架389

4．光源390

二、感光材料390

（一）胶片390

（二）相纸395

三、显微镜摄影的装置、操作与曝光397

1．设备的装置397

2．操作397

3．曝光398

4．摄影记录400

5．未染色标本的摄影与黑白负片的选择401

6．需要彩色摄影的切片标本401

7．取景401

四、显微摄影与翻拍技术402

1．显微摄影402

2．翻拍技术404

五、滤色镜的应用406

六、印相与放大407

（一）黑白照片的印制407

（二）黑白照片的放大408

（三）彩色幻灯片、照片印制与放大时的校色408

七、感光材料曝光后的显影加工412

1．黑白负片的显影过程413

2．黑白负片显影配方简介413

3．显影液各成分的特性415

4．显影的操作过程416

5．影响显影的因素417

八、几种试剂性能简介419

九、暗室的设备和布置422

附录424