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第一章绪论1

目 录1

一、简史2

二、组织培养工作方法5

第二章体外培养细胞7

一、细胞类型7

（一）贴附型7

1．成纤维细胞型8

2．上皮细胞型8

（二）悬浮型9

二、细胞形态结构9

3．游走细胞型9

4．多形性细胞型9

三、细胞周期13

（一）细胞周期和细胞分裂指数14

（二）细胞周期和DNA合成16

（三）有丝分裂18

1．前期18

2．中期19

（一）染色体20

四、细胞遗传学特征20

3．后期20

4．末期20

（二）细胞性别22

五、细胞生存条件和代谢23

（一）生存条件24

（二）细胞代谢25

六、细胞死亡31

第三章设备和装置32

一、实验室32

（一）准备室33

（二）无菌室34

1．无菌操作室34

2．洁净工作台35

3．无菌操作箱35

（三）研究室35

二、常备装置36

（一）电热恒温培养箱36

（六）真空泵37

（五）离心机37

（七）蒸馏器37

（三）高压蒸汽消毒器37

（二）电热干燥箱37

（四）冰箱37

（八）滤器39

（九）洗涤器39

（十）CO2恒温培养箱39

（十一）旋转培养装置40

（十二）液氮容器40

（十三）显微镜40

（二）玻璃器皿41

2．培养瓶41

1．玻璃瓶41

（十四）天平41

（一）器械41

三、器械和器皿41

（十五）其它41

8．抽滤瓶43

7．吸管43

6．三角瓶43

4培养管43

3．卡氏瓶43

5．培养皿43

1．酒精灯44

3．铝饭盒44

2．煮沸锅44

4．胶塞44

（三）其它杂品44

10．匀浆器44

9．消毒筒44

5．胶帽45

6．金属架45

第四章清洗与消毒46

一、清洗46

（一）玻璃器皿的清洗46

1．清洗要领46

2．清洗步骤48

（二）塑料器皿的清洗48

（三）滤器的清洗48

二、消毒49

（五）金属器械的清洗49

1．玻璃滤器49

2．蔡司滤器49

（四）胶塞的清洗49

（一）紫外线50

（二）干热消毒50

（三）湿热消毒50

（六）煮沸消毒51

（七）包装51

（五）消毒剂51

（四）滤过消毒51

第五章培养用液53

一、水和平衡盐溶液54

（一）水54

（二）平衡盐溶液54

1．主要成分54

2．BSS配制方法55

3．注意事项56

二、天然培养基57

（一）血浆的制备57

（二）鼠尾胶原的制备58

（三）鸡胚浸出液的制备60

（四）血清的制备62

（五）血清代用品64

三、合成培养液65

（一）合成培养液种类65

（二）合成培养液的主要成分77

1．氨基酸77

（三）合成培养液的配制78

5．其它成分78

4．无机盐78

3．碳水化物78

2．维生素78

1．199培养液79

2．Eagle培养液84

3．RPMI 1640培养液85

4．粉剂型培养基87

四、其它常用液87

（一）消化液87

1．胰蛋白酶溶液87

2．EDTA溶液88

1．NaHCO3溶液89

2．HEPES的使用89

（三）抗菌素液89

1．青、链霉素（双抗）89

（二）pH调整液89

（四）细菌培养基90

1．肉浸液琼脂90

3．制霉菌素90

2．卡那霉素90

2．血液琼脂91

3．支原体培养基91

（五）肝素抗凝剂92

第六章细胞和组织培养技术方法93

一、培养分类93

二、要领和操作要求94

（一）无菌操作94

（二）取材96

2．鼠肾或鼠胚组织97

1．鸡胚组织97

3．外科手术取材98

4．取皮肤98

5．取血99

6．取骨髓、羊水和胸腹水99

（三）组织分离99

1．离心分离99

2．切割分离99

3．消化分离100

4．计数分装法102

（四）预防污染104

三、常用培养法104

（一）血浆加胎汁培养104

1．悬滴培养法105

2．卡氏瓶培养法107

（二）合成培养基培养108

1．单层细胞培养法109

2．组织块培养法112

3．血液培养法114

4．旋转管培养法115

5．悬液细胞培养法116

（三）肿瘤细胞培养117

1．肿瘤细胞培养法119

2．肿瘤细胞的生物学特性121

四、特殊培养法122

（一）支持物培养法122

（二）单细胞分离培养法123

1．毛细管分离法124

2．集落形成分离法126

5．多孔塑料板分离法127

4．盖片分离法127

3．琼脂分离法127

（三）灌流小室培养法128

1．设计要求128

2．常用灌流小室128

五、细胞常规检查130

六、细胞生物学检查和鉴定134

（一）解剖学方面134

（二）细胞生物学方面135

1．中性缓冲福尔马林140

（二）常用固定液140

一、细胞和固定140

（一）细胞培养140

第七章细胞形态学和细胞化学观察法140

2．Bo uin氏固定液141

3．FAA固定液141

4．Carnoy固定液141

二、一般染色法141

（一）苏木精－伊红（H.E.）染色141

（二）Giemsa染色142

（三）May-Grünwald-G:emsa染色143

（四）火棉胶揭膜法144

三、细胞化学法145

（一）孚尔根反应显示DNA方法145

1．原理145

2．方法146

3．结果147

（二）甲绿－派郎宁显示DNA和RNA147

1．原理147

2．方法147

2．方法149

1．原理149

3．结果149

（三）吖啶橙荧光染色法显示DNA和RNA149

3．结果150

（四）2,2-2羟基－6,6-2萘基二硫化物（DDD）法显示硫氢基150

1．原理150

2．方法150

3．结果151

（五）多糖类的显示151

1．原理151

2．方法152

1．原理153

2．方法153

3．结果153

（六）苏丹黑B显示脂类153

3．结果154

（七）碱性磷酸酶的显示154

1．原理154

2．方法155

2．方法156

1．原理156

（八）酸性磷酸酶的显示156

3．结果156

3．结果157

（九）三磷酸腺苷酶（ATPase）显示法157

1．原理157

2．酸性ATP酶显示法157

3．中性ATP酶显示法158

4．碱性ATP酶显示法159

1培养瓶细胞直接摄影160

（一）活细胞显微摄影160

四、活细胞观察法160

2．活细胞相差显微摄影162

（二）显微摄电影术164

1．显微摄电影装置165

2．暗室设施165

3．拍摄用培养细胞准备166

（三）缩时间隔时间167

（二）技术方法169

（一）原理169

五、电子显微镜观察法169

1．原位包埋法170

2．脱钙卵壳膜包埋法171

3．离心分离包埋法174

第八章细胞生物学方法175

一、性染色质检查法175

（一）原理175

（二）显示方法175

1．X染色质显示法175

2．Y染色质显示法176

二、染色体显示法177

（一）原理177

1．刺激细胞增殖和获取中期分裂相177

2．低张处理178

3．固定178

（二）常用显示染色体方法178

1．传代细胞培养178

2．微量周围全血白细胞培养法180

3．羊水细胞培养182

4．皮肤培养183

（三）染色体显带184

1．原理和要领184

2．显Q带法186

3．胰酶－Giemsa显G带法186

4．显G带法之二187

（四）姐妹染色单体分化染色188

1．原理188

2．方法188

（一）原理191

三、细胞融合法191

3．注意事项191

（二）方法192

1．仙台病毒诱导细胞包融合法192

2．聚乙二醇诱导细胞融合法194

（三）杂种细胞的选择195

1．HAT系统197

2．亚硝基羟基丙氨酸－腺嘌呤系统及其它199

3．细胞行为特性的选择199

（四）染色体的分离199

1．松胞菌素B201

四、细胞脱核法201

（一）原理201

2．培养细胞用玻璃片或塑料片202

3．垫圈202

（二）脱核程序203

1．细胞培养203

2．离心脱核203

3．分离203

1．同位素标记物204

2．标记204

（一）原理204

五、同位素标记自显影术204

3．乳胶205

（二）技术方法（脉冲式标记）206

六、细胞同步化法207

（一）分裂细胞脱离法208

2．悬浮细胞209

1．准备细胞209

3．分离细胞209

（三）离心分离同型细胞法209

1．准备细胞209

（二）秋水仙素阻抑法209

2．阻抑分裂209

3．分离培养210

（四）胸腺嘧啶核苷双阻断法210

1．TdR处理210

2．离心210

3．TdR处理210

4．培养210

一、ATCC登记的人组织来源的细胞株211

附录211

二、ATCC登记的哺乳动物组织来源的细胞株213

三、国内已建立的人细胞株或细胞系216

四、Mcllvein（200毫升）缓冲液217

五、S？rensen（100毫升）缓冲液217

六、酒精稀释表218

七、常用人工合成培养基219

八、离心速度和离心力换算表221

九、常用缩写名词222

十、参考文献223