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目录1

第一部分 绪论和基本理论知识1

1绪论1

组织培养基本概念1

对组织培养的评价2

组织培养发展简史3

早期组织培养3

组织培养的建立3

现代组织培养4

组织培养的发展4

我国组织培养的发展6

对组织培养工作者的要求和工作方法7

2组织培养细胞生物学8

体内、外细胞的差异和分化8

差异8

分化9

体外培养细胞的分型10

贴附型10

细胞形态结构13

大体形态13

悬浮型13

超微结构15

组织培养细胞的生长和增殖过程16

组织培养细胞生命期16

组织培养细胞一代生长过程18

细胞周期21

细胞相互关系24

组织培养细胞遗传学特征25

细胞生存环境和代谢27

天然培养基33

合成培养基33

人工培养基33

无血清培养基34

附着底物34

抑制细胞生长因素35

细胞代谢35

3建立细胞系或细胞株39

体外培养细胞的种类和命名39

建立细胞系（或株）的要求41

已建立细胞的鉴定、管理和使用42

无菌操作设施43

实验室设计43

第二部分 实验室设施条件、培养用液43

4实验室设计和设备43

实验室设备46

大型装置和仪器47

器械51

培养器皿51

杂用品53

5培养用液55

水56

平衡盐溶液56

水和平衡盐溶液56

天然培养基58

鸡血浆的制备58

鸡胚浸出液的制备58

小牛血清60

水解乳蛋白62

鼠尾胶原63

合成培养液64

合成培养液的种类64

合成培养液的主要成分74

合成培养液的配制75

培养液的种类82

无血清培养基83

基础培养液84

附加成分84

其它常用液88

消化液88

pH调整液90

抗生素液90

6清洗与消毒91

清洗91

玻璃器皿92

胶塞93

塑料器皿94

包装94

消毒94

紫外线95

干热消毒95

湿热消毒95

滤过消毒96

射线消毒97

消毒剂的使用98

无菌操作100

基本要领和要求100

第三部分 基本培养技术100

7细胞和组织培养基本技术方法100

取材102

取鸡胚组织102

取鼠胚组织103

取皮肤104

取血104

取骨髓组织、羊水、胸水和腹水104

机械分散组织法105

切割分离组织法105

离心分离法105

组织分离105

消化分离法107

细胞计数法112

细胞冻存114

原理114

要点115

冻存方法115

复苏方法117

初代培养119

双盖片悬滴培养法119

细胞运输119

8天然培养基组织培养法119

换液和传代121

柯氏瓶培养法122

9人工合成限定培养基组织培养法123

初代培养124

消化培养法124

组织块培养法127

传代培养128

加支持物培养法130

要求131

原理131

悬浮培养131

要点131

10单细胞分离培养131

提高克隆形成率的措施132

技术方法135

低密度细胞悬液的制备136

接种138

11微载体细胞培养142

微载体及其性质143

原理143

微载体细胞培养方法145

12球体细胞培养146

原理146

培养方法146

球体细胞培养146

球体细胞和单层细胞混合培养148

13培养细胞生物学检测和建立细胞株（或系）149

细胞培养常规检查149

形态学方面151

细胞生物学检测151

细胞生长方面153

活细胞直接观察156

细胞遗传学方面156

细胞转化及恶性程度检查156

其它方面观察160

14培养细胞同工酶的测定160

原理160

方法161

要点162

15二倍体细胞培养162

方法163

16建立突变细胞系163

原理163

突变164

HGPRT基因164

方法165

细胞选择165

诱发HGPRT－缺欠型166

肿瘤细胞生物学特性168

肿瘤细胞培养基本知识168

17肿瘤细胞培养168

肿瘤细胞培养技术要点169

体外培养肿瘤细胞生物学检测175

对肿瘤细胞株或细胞系的评价175

18各别器官组织细胞的培养176

上皮细胞培养176

表皮细胞培养177

乳腺组织培养178

内皮细胞培养180

传代培养182

消化法培养182

肝细胞培养182

初代组织块培养182

神经胶质细胞培养183

肌组织培养184

骨骼肌细胞培养184

心肌细胞培养185

巨噬细胞培养185

培养技术要点185

培养方法187

空气189

污染途径189

19组织培养的污染、检测和排除189

清洗消毒190

操作190

血清190

组织190

污染对细胞的影响190

霉菌污染191

细菌污染191

支原体污染和检测191

支原体种类191

支原体生物学特性和对细胞的影响192

支原体的检测194

微生物污染的排除197

抗生素197

加温处理197

动物体内接种198

巨噬细胞吞噬法198

细胞和固定200

常用固定液200

细胞培养200

20细胞形态学和细胞化学观察法200

第四部分 观察法和研究技术200

一般染色法201

苏木精－伊红染色201

Giemsa染色法202

May-Grünwald-Giemsa染色203

火棉胶揭膜法203

细胞化学法204

Fuelgen反应显示DNA方法204

甲绿－派郎宁显示DNA和RNA206

吖啶橙荧光染色法显示DNA和RNA207

2,2－二羟基－6,6－二萘基二硫化物（DDD）法显示硫氢基208

过碘酸Schiff反应显示糖原和其它多糖209

苏丹黑B显示脂类（McMaus改良法）210

碱性磷酸酶的显示211

酸性磷酸酶的显示213

三磷酸腺苷酶显示法214

葡萄糖－6－磷酸酶显示法216

细胞色素氧化酶217

琥珀酸脱氢酶显示法（简称SDH）218

乳酸脱氢酶（LDH）219

葡萄糖－6－磷酸脱氢酶219

原理220

电子显微镜观察法220

原位包埋法221

脱钙卵壳膜包埋法223

聚苯乙烯盖片培养225

离心分离包埋法225

21活细胞观察法226

培养瓶细胞直接摄影226

活细胞相差显微摄影227

缩时显微摄电影术229

拍摄用培养细胞的准备230

显微摄影装置230

暗室设施230

缩时间隔确定232

拍摄程序233

22细胞遗传学方法234

性染色质检查法234

原理234

常用显示染色体方法234

碳酸复红显示法235

硫堇染色法235

原理236

染色体显示法236

Y．染色质显示法236

染色体显带242

显Q带法244

胰酶－Giemsa显G带法244

显G带法之二245

姐妹染色单体分化染色245

微核试验用细胞248

原理248

微核试验248

染色体脆性位点检测248

微核试验方法249

微核的标准249

23细胞融合法250

原理250

方法251

仙台病毒诱导细胞融合法251

聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合法252

杂种细胞的选择253

细胞行为特性的选择256

染色体的分离256

24非程序DNA合成257

原理257

UDS用细胞258

UDS的测定258

放射自显影法258

细胞259

本底259

药物特性259

影响UDS因素259

液闪计数法259

25细胞脱核法260

原理260

脱核程序262

26同位素标记自显影术263

原理263

技术方法（脉冲式标记）265

27细胞同步化法266

细胞分裂相脱离法267

秋水仙素阻抑法268

离心分离同型细胞法268

胸腺嘧啶核苷双阻断法269

28细胞分离技术269

梯度沉降法270

原理270

方法271

束流荧光分离细胞法274

细胞自发转化276

基本概念和原理276

细胞转化与恶变276

29体外培养细胞的转化276

第五部分 组织培养技术的应用276

人工诱发细胞恶性转化277

细胞转化基本过程277

诱发277

DNA的损伤与修复277

发展和表现278

转化实验方法278

细胞278

人工诱发转化实验程序280

转化细胞的检测283

30细胞培养在癌基因研究中的应用284

基本原理285

关于癌基因285

技术方法285

总DNA的提取285

转染287

共转染289

受体细胞的选择290

细胞选择291

31组织培养药物测试291

药物剂量292

测试程序293

观测指标294

32在杂交瘤技术中的应用295

原理296

杂交瘤细胞的制备298

克隆化培养303

抗体的检测305

单克隆抗体的大量制备307

缩写名词308

第六部分 附录308

常用名词译名和释义310

国内已建人和动物的一些主要细胞系（或株）313

国际常用细胞系（或株）317

常用人工合成培养基319

常用液体配制技术和参考资料320

实验常用度量衡323

酒精稀释表324

缓冲液325

离心速度和离心力换算表326

参考资料326