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第一章　实验室设备及常用试剂1

一、主要设备1

（一）显微镜1

（二）切片机及其他设备4

二、常用试剂6

第二章　取材及固定8

一、动物的处死8

二、取材与固定8

三、固定剂9

（一）各种试剂的一般性能9

（二）常用的混合固定剂11

四、利用微波照射固定生物标本简介18

第三章　组织固定后的处理与切片22

一、组织固定后的处理22

（一）冲洗或漂洗22

（二）脱水22

（三）透明或媒浸23

（四）二甲氧基丙烷石蜡包埋法25

二、其他各种包埋法与切片法27

第四章　染料、染色与常用染液染色法36

一、染料36

（一）天然染料36

（二）人工合成染料37

二、染色42

（一）活体染色42

（二）固定后染色42

（三）染色时常会遇到的问题及其处理45

三、常用染液染色法46

（一）细胞核的染色46

（二）细胞质常用染料的染色56

（三）脂肪染料57

第五章　细胞器与分裂期染色体58

一、高尔基复合体58

（一）Cajal铀银法58

（二）Da Fano钴银法59

（三）Aoyama镉银法60

（四）Ludford锇酸法60

二、线粒体60

（一）Regaud铁矾苏木精法60

（二）Aeidenhain铁矾苏木精法61

（三）Altmann苯胺－酸性品红改变法62

（四）Harmond坚牢绿法63

三、细胞分裂期的中心体与染色体64

（一）取材64

（二）固定与切片64

（三）染色法64

第六章　纤维性结缔组织与细胞67

一、胶原纤维67

（一）Heidenhain“AZAN”三色法67

（二）AZAN改变法68

（三）Mallory三色法68

（四）武兆发改良Mallory一步三色法69

（五）Masson染色法（改变法之一）69

（六）Masson染色法（改变法之二）70

（七）Van Gieson染色法71

二、弹性纤维71

（一）Schmorl染色法71

（二）台盼蓝活体染色荧光观察法72

（三）Masson三色染色法72

（四）Verhoeff碘-苏木精染色法73

三、网状纤维74

四、巨噬细胞与成纤维细胞77

（一）注射台盼蓝显示法78

（二）天青－伊红－瑞氏染色法78

五、浆细胞79

（一）甲基绿－派洛宁染色法79

（二）天青A－伊红染色法79

六、肥大细胞80

（一）中性红染色法80

（二）硫堇染色法80

（三）甲基胺蓝染色法80

（四）肥大细胞的腹腔液离心沉淀法81

（五）阿利新蓝－番红法81

（六）肥大细胞颗粒酸性品红染色法81

第七章　软骨和骨83

一、软骨83

（一）透明软骨茜素红－美蓝染色法83

（二）透明软骨的临界电解质浓度法84

（三）PAS法84

（四）弹性软骨染色法84

（五）纤维软骨染色法84

二、骨84

（一）磨骨84

（二）脱钙骨85

（三）脱钙剂与脱钙87

（四）染色89

（五）电镜超微结构骨组织标本制备法89

（六）骨碱性磷酸酶与磷酸盐显示法90

第八章　血液及骨髓92

一、血液和骨髓涂片法92

（一）血液涂片92

（二）骨髓涂片93

二、涂片染色94

（一）瑞氏染色94

（二）吉姆萨染色94

（三）Wright-Giemsa染液混合染色95

三、网织红细胞活体染色95

（一）网织红细胞试管染色法95

（二）网织红细胞玻片染色法96

四、骨髓切片常规染色96

（一）制作骨髓切片96

（二）骨髓切片常规染色96

五、血细胞的组织化学反应98

（一）核酸98

（二）多糖99

（三）含铁血黄素99

（四）酶100

六、血细胞酶的细胞化学超微结构观察法107

（一）分离外周血中的白细胞107

（二）分离外周血中的无粒白细胞108

（三）分离外周血内的粒细胞109

（四）分离外周血内的血小板110

（五）血细胞常规电镜细胞化学标本制作111

（六）白细胞过氧化物酶电镜标本制作112

（七）白细胞碱性磷酸酶电镜标本制作柠檬酸铅法113

（八）白细胞酸性磷酸酶电镜标本制作113

七、多能造血干细胞（CFU-S）的测定法115

（一）外源性CFU-S测定法115

（二）内源性CFU-S测定法118

（三）本实验技术建立的意义118

八、巨核系祖细胞（CFU-Meg）的体外培养118

（一）小鼠巨核系祖细胞的体外培养118

（二）小鼠巨核细胞集落的胆碱酯酶染色法120

（三）人巨核系祖细胞的体外培养121

九、粒－单系祖细胞（CFU-GM）的体外培养122

（一）小鼠粒－单系祖细胞的体外培养122

（二）人粒－单系祖细胞的体外培养124

十、红系造血祖细胞（BFU-E）的体外培养124

（一）实验设备与器材125

（二）准备试剂125

十一、人植物血凝素白细胞条件培养液（PHA-LCM）制备126

十二、小鼠美洲商陆脾细胞条件培养液（PWN-SCM）制备126

十三、培养步骤和方法127

十四、培养结果128

第九章　肌肉组织129

一、骨骼肌129

（一）Gomori三色染色一步法129

（二）磷钨酸苏木精快染法130

（三）磷钨酸苏木精慢染法131

（四）骨骼肌组织活检的酶组化法132

（五）Ralis等（1977）肌纤维染色法136

二、心肌136

三、平滑肌137

第十章　神经组织139

一、Golgi法显示神经元胞体形态139

二、Golgi-Cox法显示神经元胞体形态142

三、灌注的快速Golgi法143

四、神经元胞体的尼氏体染色法144

（一）硫堇染色法显示尼氏体145

（二）棓花青染色法显示尼氏体145

五、神经元纤维与轴索的银染法146

（一）Holmes镀银法146

（二）LindeR镀银法（1978）147

（三）Sevier-Munger改变法148

（四）Cajal水合氯醛（Ⅵ）法149

六、肠肌丛镀银法150

七、氯化金法显示完整的运动终板、肌梭、腱梭和环层小体（Ranvier改变法）150

（一）氯化金法之一150

（二）氯化金法之二151

八、美蓝活体染色显示周边神经终末结构151

九、髓鞘的染色153

（一）Pal-Weigert法154

（二）劳克坚牢蓝法155

（三）施－兰氏切迹染色法156

十、溃变纤维显示法157

（一）Marchi法的Swank-Davenport改变法157

（二）Eager法显示溃变轴索157

（三）Ebbesson-Robinson双重银法158

十一、神经胶质159

（一）Del Rio-Hortega碳酸银法显示小胶质细胞（Penfield改良法）159

（二）Grono法显示少突胶质细胞161

（三）Ramon Y Cajal氯化金升汞法显示星状胶质细胞162

（四）Marchalls法显示小胶质和少突胶质细胞163

（五）Golgi法显示少突胶质细胞163

（六）Scoff改变法石蜡或冰冻切片显示三种神经胶质细胞164

十二、脑的大厚片制作法165

（一）Mülligan的脑块浸染法165

（二）脑的各部结构大面积火棉胶切片法166

十三、中枢神经组织超薄大片的制作技术167

十四、辣根过氧化物酶（HRP）微量注射与离子透入法（轴突传递法的应用）168

（一）辣根过氧化物酶微量注射法168

（二）辣根过氧化物酶离子透入法170

（三）四甲基联苯胺显色法171

第十一章　血管注射技术173

第十二章　消化系统和呼吸系统176

一、消化系统176

（一）常规苏木精－伊红染色法176

（二）过碘酸Schiff反应178

（三）阿利新蓝染色法178

（四）粘液卡红染色法178

（五）小肠潘氏细胞染色法179

（六）闭锁堤179

（七）消化管的内分泌细胞179

（八）肠肌丛（Auerbach神经丛）镀银法184

（九）肝血管双色注射185

（十）肝血窦内星状细胞活体注射显示法185

（十一）肝细胞糖原的组织化学显示法186

（十二）肝细胞间的胆小管显示法186

（十三）肝贮脂细胞显示法188

（十四）胰岛A、B及D细胞显示法189

二、呼吸系统192

（一）取材192

（二）固定192

（三）嗅细胞及神经显示法193

（四）肺的弹性纤维染色法193

（五）肺的网状纤维染色法193

（六）肺泡毛细血管网注射显示法193

（七）肺泡上皮镀银法193

（八）肺泡Ⅱ型细胞显示法194

（九）分离气管上皮细胞法194

第十三章　泌尿系统与生殖系统196

一、泌尿系统196

（一）肾的常规染色196

（二）球旁细胞（JG）颗粒染色196

二、生殖系统198

（一）精液内的精子检测199

（二）三色法199

（三）Papanicoloau精液涂片染色法200

（四）精子核的苯胺蓝染色法201

（五）精子核的萘醌磺酸钠（NQS）染色法配制试剂202

（六）精子顶体的结晶紫染色法203

（七）精子顶体的酶活性检测—底膜法204

（八）人类精子头部膜的超薄切片改进染色法205

第十四章　内分泌腺208

一、甲状腺滤泡旁细胞显示法208

（一）铅苏木精法208

（二）Grimellus银染法209

（三）Cajal银染法210

二、甲状旁腺嗜酸性腺细胞211

三、肾上腺嗜铬细胞211

四、松果体细胞浸银显示法215

五、脑垂体216

（一）PFA-AB-PAS-OG法217

（二）AT-LFB-PAS法218

（三）BrAB-OFG法220

（四）铬矾－苏木精－焰红法221

（五）醛－品红染色法显示神经分泌物质223

（六）过甲酸－阿利新蓝染色法显示神经分泌物质法224

（七）垂体细胞的染色224

第十五章　皮肤、眼球及内耳225

一、皮肤225

（一）皮肤的一般染色225

（二）黑色素细胞的显示225

（三）细胞间桥229

二、眼球229

（一）Szent-Gyorgi固定眼球切片法229

（二）复方甲醛固定眼球法230

（三）甲醛－冰醋酸－酒精（FAA）固定眼球法230

（四）胚鼠视网膜移植入成年鼠视网膜损伤部位法231

三、内耳232

（一）常规染色法232

（二）内耳蜗螺旋神经节双极神经细胞镀银显示法（De Castro）233

第十六章　染色体标本的制作235

一、用外周血作染色体培养235

（一）器材准备235

（二）试剂配备235

（三）接种培养236

（四）制作染色体标本236

二、骨髓染色体直接制备法237

三、胸、腹水癌细胞染色体制备238

四、小鼠睾丸生精细胞染色体制作238

五、染色体分带技术239

六、姊妹染色单体互换技术240

七、用羊水细胞作染色体培养243

八、用培养细胞染色体标本作扫描电镜观察法243

九、自制植物血凝素（PHA）法244

（一）生理盐水提取法244

（二）乙醚－酒精提取法244

第十七章　脱落细胞的涂片与染色245

一、标本的处理245

（一）常用的标本采集法246

（二）标本的固定246

（三）染色法246

二、脱落细胞的观察249

（一）正常女性生殖管道的脱落细胞249

（二）关于病变的细胞学检查250

（三）特殊的非典型状态251

（四）呼吸道的脱落细胞258

（五）胸、腹腔渗出液中的脱落细胞259

三、性染色质的染色法259

（一）Moore焦油紫染色法259

（二）Guard猩红－坚牢绿染色法260

四、核仁组成区相关嗜银蛋白（Ag-NOR）染色法260

（一）取材与固定261

（二）染色步骤261

第十八章　细胞分离技术263

一、细胞分离法263

（一）粘附法263

（二）密度梯度离心法267

（三）亲合免疫分离法273

（四）荧光激活细胞分类器275

二、细胞计数276

三、细胞活性测定278

（一）台盼蓝染色法278

（二）伊红Y染色法278

（三）苯胺黑染色法279

（四）吖啶橙荧光素测定细胞活性279

（五）二乙酸盐荧光素测定细胞活性280

第十九章　常用的组织化学方法281

一、核酸281

（一）Feulgen反应显示DNA282

（二）甲基绿－派洛宁染色显示DNA与RNA285

（三）Schiff反应块染法显示DNA287

（四）甲基绿的快速提纯法288

二、碳水化合物290

（一）碳水化合物分类290

（二）碳水化合物各组分显示法291

三、蛋白质与氨基酸299

（一）蛋白质结合的氨基300

（二）羟酚基300

（三）二硫键与硫氢基301

（四）吲哚基304

（五）胍基305

（六）二硝（基）氟苯法（DNFB）检测蛋白质306

（七）汞－溴酚蓝法显示蛋白质308

（八）坚牢绿法显示碱性蛋白质308

（九）蛋白质各种活性基团封阻法309

四、脂类310

（一）锇酸法显示非饱和脂质311

（二）溴－苏丹黑法显示脂类311

（三）溴－丙酮－苏丹黑法显示磷脂312

（四）油红O法显示脂类312

（五）硫酸尼罗蓝法显示酸性与中性脂类313

（六）铜－红氨酸法显示游离脂肪酸313

（七）过氯酸－萘醌（PAN）法显示胆固醇及其酯类314

（八）酸性苏木红法显示磷脂315

（九）浆醛反应法显示缩醛磷脂317

（十）脂类的抽提317

（十一）油红O显示培养的平滑肌细胞内所含脂类318

（十二）陈旧性脂肪组织的深冻切片法319

五、酶类319

（一）酶的分类320

（二）酶的组织化学反应法320

（三）影响显示酶的因素321

（四）碱性磷酸酶钙－钴显示法321

（五）碱性磷酸酶重氮盐偶联显示法322

（六）酸性磷酸酶铅沉淀显示法322

（七）酸性磷酸酶重氮盐偶联法显示法323

（八）酸性磷酸酶偶氮色素法显示法324

（九）表皮郎格罕细胞Na-KATPase显示法325

（十）枸橼酸铅法显示脑组织的Ca2+-ATPase超微结构定位326

（十一）硫代胆碱法显示胆碱酯酶（koelle）327

（十二）koelle块染法显示胆碱酯酶329

（十三）Karnovsky-Roots直接法显示胆碱酯酶329

（十四）脑细胞的细胞色素氧化酶的二氨基联苯胺（DAB）显示法330

（十五）过氧化物酶－抗过氧化物酶（PAP）法显示γ－氨基丁酸331

第二十章　荧光显微镜技术和应用333

一、荧光显微镜的使用333

二、荧光色素与荧光染色337

三、组织和细胞的自发性荧光340

（一）显示肾上腺髓质细胞中去甲肾上腺素的荧光方法341

（二）显示神经细胞、神经纤维和肥大细胞等单胺成分的荧光法341

四、细胞和组织的荧光染色法343

（一）活细胞荧光染色法343

（二）固定标本荧光染色法345

第二十一章　免疫细胞化学技术及应用352

一、免疫细胞化学技术的基本原理352

（一）直接法352

（二）间接法354

（三）补体法355

二、免疫细胞化学技术方法356

（一）免疫荧光技术356

（二）免疫酶标技术358

（三）过氧化物酶－抗过氧化物酶复合物法359

（四）标记亲合素－生物素法361

（五）桥连亲合素生物素法362

（六）亲合素－生物素－过氧化物酶复合物法363

三、免疫细胞化学技术的应用365

（一）在细胞学方面的应用365

（二）在微生物学中的应用367

（三）在寄生虫学中的应用368

（四）在临床病理学中的应用370

（五）在自身免疫性疾病中的应用370

四、免疫金的细胞化学和组织化学技术371

（一）制备胶体金371

（二）待标记蛋白质和胶体金的处理373

（三）最适稳定蛋白质浓度的确定373

（四）蛋白质的胶体金标记374

（五）胶体金探针的纯化374

（六）胶体金探针的鉴定375

五、光镜免疫金（IGS）法和免疫金银法（IGSS）375

（一）IGS间接法375

（二）IGSS间接法376

六、电镜免疫金法376

（一）包埋前染色步骤376

（二）包埋后染色步骤377

（三）胶体金双标或多标技术377

第二十二章　放射自显影术379

一、放射自显影术的基本原理379

二、实验室设备及常用试剂380

三、操作方法383

（一）整体动物放射自显影术383

（二）显微放射自显影术384

（三）体外培养细胞的放射自显影术385

（四）电子显微镜放射自显影术386

四、注意事项388

第二十三章　电镜标本制备技术389

一、超薄切片技术389

（一）配制固定液389

（二）取材与固定392

（三）脱水395

（四）包埋395

（五）超薄切片前的准备398

（六）超薄切片403

（七）染色406

二、扫描电镜标本制备技术411

（一）取材和固定411

（二）脱水和干燥412

（三）喷镀413

三、冷冻断裂术416

四、冷冻蚀刻复型术417

1．冷冻417

2．断裂418

3．蚀刻418

4．复型418

5．分裂复型膜418

第二十四章　胚胎标本的制作法419

一、两栖类胚胎标本的制作419

（一）采卵及人工受精419

（二）卵裂，囊胚，原肠胚及神经胚420

（三）固定与固定液420

（四）卵的胶质膜脱除法420

（五）脱水与包埋420

（六）染色421

二、鸡胚标本的制作421

（一）卵育法421

（二）取胚法422

（三）固定422

（四）染色423

（五）鸡胚切片及整体标本制备423

三、小白鼠胚胎标本的制作423

（一）选择动物423

（二）小白鼠的性周期424

（三）小白鼠的交配与计算胎龄424

（四）受精和卵裂425

（五）取材425

（六）固定426

（七）包埋与切片426

（八）整装标本427

四、人胚或猪、羊胚标本的制作429

（一）整体标本法429

（二）连续切片法430

第二十五章　细胞形态计量方法432

一、细胞群体的抽样测量与误差433

二、测试系统434

三、细胞二维形态参数的测定436

四、细胞三维参数的测定438

五、误差的计算方法447

六、实用举例450

第二十六章　显微镜摄影与显微摄影458

一、显微镜摄影458

（一）显微镜458

（二）摄影操作459

二、显微摄影465

三、感光材料467

（一）黑白全色负片467

（二）彩色负片467

（三）黑白相纸467

（四）彩色相纸467

（五）黑白及彩色电影正片467

（六）彩色反转片468

四、彩色正片与彩色相纸加工时的校色468

（一）三种滤色片之间的成色关系468

（二）校色举例和记录法468

五、显影469

（一）感光材料曝光的显影操作安排469

（二）黑白胶片、相纸显影469

（三）彩色负片显影471

（四）国产油溶性高温彩色正片显影472

（五）彩色涂塑相纸的显影（EP-2洗印）473

六、关于实验室摄影工作的几点说明和建议475