《表2 所用引物序列:天蓝色链霉菌中长链3-酮脂酰ACP合成酶的功能》

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《天蓝色链霉菌中长链3-酮脂酰ACP合成酶的功能》


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注:引物中下划线序列为引入的酶切位点.

以天蓝色链霉菌A3(2)的基因组为模板,利用表2中所列引物分别PCR扩增获得天蓝色链霉菌的ScofabF1、ScofabF2、ScofabF3以及ScoredR基因。扩增产物纯化后分别连入pMD19-T载体,并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过测序验证获得质粒p YH01(Scofab F1)、p YH02(Scofab F2)、pYH03(ScofabF1)和pYH04(ScoredR)。而后用Nde I和HindⅢ双酶切后消化质粒,回收基因片段,分别克隆到表达载体pBAD24M上,获得互补质粒pYH05、pYH06、pYH05、pYH08。用类似策略,将回收的基因片段分别克隆到pET-28b上,获得表达载体pYH09、pYH10、pYH11、pYH12。