《表1 L9(34)正交试验因素水平表》

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《Pseudomonas alcaliphila AD-28的脱氮性能及其关键酶活性》

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将1 mL处于对数生长期的菌株AD-28接种到装有100 mL DM培养基的250 mL锥形瓶中，30°C、150 r/min振荡培养24 h。将菌液4°C、10 000 r/min离心20 min，弃上清收集菌体。用0.01 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液洗3次，重悬菌体于离心管中，用超声波细胞粉碎机破碎，工作条件按单因素和正交试验表（表1）进行。超声波破碎后，将破碎液4°C、14 000 r/min离心20 min，上清即为粗酶液。由于蛋白质对紫外光具有吸收作用，其最大吸收光度在波长280 nm处，通过测定细胞破碎前后280 nm处的吸光度A280变化情况，可以间接了解菌体的破碎程度和细胞内蛋白质的溶出量，并以此表征细胞破碎后的粗酶含量[9]，结果取3个重复试验平均值。