《表1 细菌、真菌的PCR扩增引物设计》

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《基于下一代测序分析3种不同保鲜处理的香椿在贮藏期间微生物多样性变化》

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对细菌16S rDNA的V57区域和真菌的ITS 1区域进行扩增，根据测序区域的选择，使用表1所示的特异引物。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）反应体系（30μL）:Phusion Master Mix（2×）15μL，Primer（2μmol/L）3μL（6μmol），gDNA（1 ng/μL）10μL（5 ng～10 ng），H2O2μL。反应程序:98℃预变性1 min；30个循环包括（98℃，10 s；50℃，30 s；72℃，30 s）；72℃，5 min。PCR产物使用2%浓度的琼脂糖凝胶进行电泳检测，根据PCR产物浓度进行等浓度混样，充分混匀后使用1×TAE浓度为2%的琼脂糖胶电泳纯化PCR产物，然后割胶并使用GeneJET胶回收试剂盒回收目标条带。使用New England Biolabs公司的NEB NextRUltraTMDNA Library Prep Kit for Illumina建库试剂盒进行文库的构建，构建好的文库经过Qubit定量和文库检测，合格后，使用HiSeq进行上机测序。