《表1 PCR扩增细菌16S r RNA基因的引物》

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《云南蛋鸡源肠炎沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性》

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按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书，提取分离菌基因组DNA。采用赵鹤庭等扩增细菌16S r RNA基因鉴定细菌种属分类的方法及引物[8]（表1）。P C R反应体系（2 5μL）:2×Ta q P C R Master Mix 12.5μL，dd H2O 9.5μL，上游引物（10μmol/L） 1μL，下游引物（10μmol/L） 1μL，DNA模板1μL。PCR反应条件：93°C 3 min；93°C 30 s，55°C 30 s，72°C 30 s，进行35个循环；72°C 7 min；4°C保存。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。表1中所有引物的PCR反应体系和反应条件相同。将分离菌株的16S r RNA基因分成首尾重叠的3个片段进行扩增，PCR产物纯化后用相应的扩增引物进行双向测序，结果采用Vector NTI软件拼接，得到大约1 450 bp的细菌16S r RNA基因序列。所得序列提交Gen Bank进行BLAST比对，确定细菌的种属分类。利用MEGA6.0软件构建分离菌进化树。引物合成及PCR产物测序由昆明硕擎生物有限公司完成。