《表1 实时荧光定量PCR所需引物序列》

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《沉默ACLY基因可抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭》

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根据蛋白质印迹法检测结果，将ACLY完全沉默的单克隆HCT116细胞（c克隆和#3克隆）作为实验组（分别命名为ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2，简称KO-1和KO-2），以ACLY未沉默的单克隆HCT116细胞（a克隆）作为对照（control，简称Ctrl）。分别收集各组细胞约2×106个，参阅RNA抽提试剂盒说明书提供的方法抽提各组细胞的RNA，用分光光度仪Nanodrop 2000测定RNA浓度；取500 ng RNA，按反转录试剂盒说明书提供的方法将其反转录为cDNA。以此cDNA为模板，应用实时荧光定量PCR试剂盒检测各组细胞中ACLY mRNA的表达水平，以亲环素B（cyclophilin B，CB）为内参照，引物序列见表1。PCR扩增条件:95℃5 min；95℃10 s、60℃30 s，共40个循环。以2-ΔΔCt值表示目的基因mRNA的相对表达水平。