《表3 各突变体在筛选平板上的生长数目及比率》

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《基于酵母双杂交技术的PRR11相互作用蛋白筛选与初步分析》

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根据PRR11氨基酸序列分析，分别构建了4个PRR11定点突变体Δ145、Δ149、Δ150、Δ145/Δ149/Δ150，PCR扩增结果如图3所示。PCR产物纯化回收后酶切和连接到诱饵载体pBT3SUC和pBT3STE，转化大肠杆菌，菌落PCR鉴定结果如图4所示，测序证实序列突变成功。按照表3的质粒组合转化酵母菌受体NMY32，每个转化反应涂板至SD-TL、SD-TLH、SD-TLHA 3种缺陷平板。结果见表3，pBT3SUC-Δ145在SD-TLH和SD-TLHA的筛选平板上的生长率为39.78%和5.847%，具有最低的自激活效应，因此对这一诱饵克隆进行3AT浓度优化后用于文库筛选。表3中的反应1和2进一步涂板后的生长率如图5和表4所示，在浓度5 mmol/L的3AT基础上，pBT3SUC-Δ145与pPR3N共转化子的生长可被完全抑制，因此采用5 mmol/L的3AT作为筛库浓度。