《表1 SOE-PCR引物序列》

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《牛结核分枝杆菌早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83基因的串联表达及其抗原性鉴定》

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根据1.2分析结果，参照MPB70（EU683971.1）和MPB83（EU683972.1）基因序列，设计4条引物（表1），采用SOE-PCR技术进行扩增。第一轮PCR:以MB总DNA为模板，以MPB70F/MPB70R为扩增引物，扩增MPB70基因片段（426 bp）；以MB总DNA为模板，以MPB83F/MPB83R为引物，扩增MPB83基因片段（513 bp）；反应条件为:94℃3 min；94℃45 s、56℃45 s、72℃45 s，5个循环；72℃5 min，4℃终止。第二轮PCR:以扩增的MPB70、MPB83为模板，以MPB70F/MPB83R为引物，扩增产物即为MPB70+MPB83串联基因，预期片段987 bp；反应条件为:94℃4 min；94℃60 s、62℃45 s、72℃60 s，30个循环；72℃10 min，4℃终止。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定并测序。