《表1 SOE-PCR引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《牛型结核分枝杆菌分泌性蛋白MPB70、MPB83基因串联重组质粒的构建及鉴定》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

针对mpb70及mpb83基因设计4条克隆引物（表1）。第一轮PCR：以MB总DNA为模板，以mpb 70F/mpb 70R为引物进行PCR扩增，扩增片段预期大小约426bp；以MB总DNA为模板，以MPB 83F/MPB 83R为引物进行PCR，扩增片段预期大小约513bp；第二轮PCR：以mpb 70、mpb 83为模板，以mpb 70F/mpb 83R为引物进行PCR，扩增产物即为mpb 70+mpb 83串联基因，片段大小约987bp。在mpb 70F和mpb 83R引物的5′端引入Bam HⅠ、Xho I酶切位点，用于构建表达载体。其中重叠延伸PCR分2步，第一步（不加引物）：94℃预变性3min；94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸45s，共5个循环；72℃5min，4℃终止；第二步（添加引物mpb 70F/mpb 83R):94℃预变性4min；94℃变性60s，62℃退火45s，72℃延伸60s，共30个循环；72℃10min，4℃终止。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定，用多功能DNA凝胶回收试剂盒回收后作为扩增模板。