《表1 RT-PCR引物序列》

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《miR-9-5p下调FRMD6促喉癌Hep2细胞存活的机制研究》

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4．实时荧光定量PCR实验:Hep2细胞分别转染对照抑制剂、miR-9-5p抑制剂、阴性对照、miR-9-5p阴性48h后，胰蛋白酶消化收集细胞，分别提取总RNA反转录合成模板cDNA，PCR引物序详见表1。每个样本3个复孔，按两步法PCR扩增，条件为:Step 1:95℃30s；Step 2:95℃5s，60℃30s（40个循环）；Step 3:Melt Curve（美国Bio-Rad公司CFX96）。反应结束后确认RT-PCR的扩增曲线及溶解曲线是否满足要求，仪器软件中自动输出Ct值，计算相对表达量采用2-△△Ct方法。