《表1 引物序列和产物长度》

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《冬凌草甲素对结肠癌LOVO细胞增殖和EMT影响的实验研究》


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注GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)

收集处于对数生长期的结肠癌LOVO细胞,经不同浓度(4、8和12μg/m L)冬凌草甲素处理48 h后收集细胞,同时设对照组(含0.1%DMSO培养液处理)。参照TRIzol说明书进行抽提上述各组细胞总RNA,按照操作说明应用反转录试剂盒合成cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参,PCR仪进行扩增。反应条件为:预变性94℃3 min;变性94℃30 s,退火56℃30 s,延伸72℃30 s;最后延伸10 min,共36个循环。将PCR产物用1.5%浓度的琼脂糖进行凝胶电泳检测(电压100 V,30min),在凝胶成像系统上观察电泳带及其位置,摄影,Image J软件将图像转换成灰度值。将各条带灰度值与内参GAPDH灰度值的比值进行分析。各引物序列和产物长度见表1。