《表1 PCR引物序列和产物长度》

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《珠海地区耐亚胺培南临床菌株耐药机制与耐药相关移动元件分析》

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煮沸裂解法制备模板DNA后，采用PCR扩增14个常见的碳青霉烯酶基因，除bla NDM-1的引物为自行设计外，其它碳青霉烯酶基因的引物、PCR反应体系及反应条件均参照文献[3-9]。PCR引物序列见表1，PCR反应总体系为20μL:含Hieff™；PCR Master Mix（With Dye）10μL，上下游引物各1μL，DNA模板1μL，加入去离子水至20μL，阴性对照菌株为大肠埃希菌DH5α。bla NDM-1引物使用Oligo7依据Gene Bank资料自行设计，反应条件为:94℃预变性5 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环；72℃终延伸10 min。随机抽取3个与预期大小相符的PCR产物送上海生工测序，测序结果在Gen Bank数据库blast比对确认后作为后续的阳性对照。对于Carba NP-d及PCR试验均为阴性的菌株，则被认为其非产碳青霉烯酶菌株。