《表4 人工污染样品RT-LAMP检出限》

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《单增李斯特菌RT-LAMP快速检测方法的建立》


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为验证所建立的RT-LAMP法在食品样品中的检测效果,选取脱脂乳为食物基质,按照梯度进行人工污染,直接提取样品RNA检验和辅以不同时间的增菌后再检验的检出结果见表4。对于人工污染脱脂乳样品直接提取RNA,目标菌的最低检出限为103 CFU/mL,低于生理盐水稀释菌液的检出限,原因是食品基质的存在一方面加大了提取的难度,另一方面也可能会带入Rnase污染。在使用TSB-YE培养基进行前增菌后,发现,分别增菌8和12 h,培养体积的扩大和受限于本身单增李斯特菌的生长速度较为缓慢,而检测所用样本又只有1 mL,仅初始菌量在104和103 CFU/25mL及以上时可以检出(DNase I处理)。而在省去DNase I处理后,检出限由于DNA的存在会提高10倍。而在增菌16 h后,菌量显著增加,使用DNase I处理时,检出限为101 CFU/25 mL,而不使用DNase I处理时,此时的检出限提高到100 CFU/25 mL,达到与国标法相同的检出限。增菌后,由于培养体积的扩大和活菌的不断繁殖,死菌及残留DNA对于检测的影响越来越小,此时可省去DNase I处理以达到更高的检出限。