《表3 重组菌和出发菌胞内腺嘌呤核苷酸 (ATP、ADP和AMP) 含量》

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《阻断辅因子NADPH合成对谷氨酸棒杆菌生长及产物合成的影响》

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从表2可以看出重组菌C.glutamicum LYSΔzwfΔmalEΔicdCg::icdSm胞内NADH含量由出发菌的1.97μmol/g DCW增加到2.73μmol/g DCW，胞内的NADH/NAD+提高了53.84%，NADPH含量降低了89.51%，在该酶的催化下和出发菌株相比不再合成NADPH而合成更多的NDAH，说明自身NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶基因（icdCg）替换成变形链球菌（Streptococcus mutans）NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶基因（icdSm），实现了辅酶依赖型的转变；胞内NAD-PH含量降低至0.15μmol/g DCW，明显低于出发菌胞内NADPH含量1.43μmol/g DCW。胞内的NAD-PH/NADP+降低了93.13%，胞内少量的NADPH，可能是由于阻断了胞内NADPH的合成，NAD（H）/NADP（H）失去平衡后，NAD激酶开始发生作用，使得少量的NADH被NAD激酶催化形成NADPH[24]。谷氨酸棒杆菌体内还有多个涉及NADPH代谢反应没有发现，如呼吸链中NADPH氧化酶的作用[25]。表3可以看出胞内ATP含量降低了13.1%，阻断了胞内NADPH的合成，即敲除了PPP途径和改变了异柠檬酸脱氢酶的辅酶依赖型后不再合成NADPH，NADPH的急剧降低致使经过电子传递链氧化生成的ATP也在一定程度上被削弱，胞内ADP和AMP无法及时转换成ATP，均有一定程度累积，扰乱了胞内腺嘌呤核苷酸平衡。