《表1 RT-PCR引物序列》

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《韩国赤芝全基因组重测序分析》

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将“1.2.1”中培养的菌丝使用TranZol UP（北京全式金）提取RNA，然后用TaKaRa PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser Kit（购自TaKaRa）反转录成cDNA。根据灵芝全基因组测序的结果，找出本实验中注释到的9个与生长相关的转录因子的CDS序列，使用Primer premier 5软件设计引物，引物序列（表1），以灵芝菌丝cDNA为模板，用SYBR?Premix Ex Taq TMⅡ（Tli RNaseH Plus）（购自TakaRa） 进行PCR。反应程序为:94℃预变性30 s，94℃变性5 s，60℃退火30 s，共40个循环。荧光定量用甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GPD）作为内参基因，基因的相对表达量用2-??CT计算。